Bagaimana untuk menjalankan analisis oleh PCR: perihalan prosedur

Pharyngitis

Reaksi rantai polimerase telah diketahui selama 30 tahun. Ia digunakan secara meluas dalam banyak bidang, dari arkeologi hingga genetik.

Ia adalah kaedah PCR yang membantu menubuhkan paterniti, tetapi selalunya ia digunakan untuk mengenal pasti pelbagai penyakit berjangkit di dalam tubuh manusia.

Bagaimanakah analisis PCR dilakukan, dan apakah itu? Kami akan cuba menjawab soalan-soalan ini secara terperinci.

Analisis PCR - apakah itu?

Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah kaedah diagnosis genetik molekul yang berketepatan tinggi, yang membolehkan untuk mengesan pelbagai penyakit berjangkit dan keturunan pada manusia, baik dalam peringkat akut dan kronik, dan lama sebelum penyakit itu dapat nyata.

Kaedah PCR benar-benar khusus dan dilakukan dengan betul tidak dapat memberikan hasil positif palsu. Iaitu, jika tidak ada jangkitan, analisis tidak akan menunjukkan apa itu. Oleh itu, kini sangat kerap untuk kelulusan diagnosis, analisis PCR tambahan diambil untuk menentukan agen penyebab dan sifatnya.

Reaksi rantai polimerase (PCR) pada tahun 1983, yang dikembangkan oleh Carey Mulllis (USA), yang pada tahun 1993 beliau dianugerahkan Hadiah Nobel dalam Kimia.

Apakah kelebihan kaedah ini?

Diagnosis dengan kaedah ini membolehkan seseorang mencari patogen secara langsung dalam gen yang terkandung di dalam bahan-bahan yang diusahakan. Ini adalah analisis yang paling tepat mengenai jangkitan genital, jangkitan tersembunyi, pelbagai penyakit kelamin.

Perbezaan diagnostik PCR daripada kaedah penyelidikan makmal lain adalah seperti berikut:

  • kaedah ini bertujuan untuk mengenal pasti patogen itu sendiri;
  • Diagnosis PCR adalah sejagat: untuk mengesan beberapa patogen;
  • Penyakit, hanya satu sampel biologi pesakit yang mencukupi;
  • Kaedah ini sangat sensitif dan tidak disertai oleh tindak balas balas yang lain.

Di samping itu, kelebihan diagnostik PCR ialah sebarang bahan biologi pesakit yang sesuai untuk dianalisis: darah, pelepasan dari alat kelamin, air kencing, air mani.

Apakah jangkitan apa yang boleh mencetuskan PCR?

Sebilangan besar patogen mungkin hadir di dalam badan, termasuk "tersembunyi" yang tidak nyata untuk masa yang lama.

Analisis smear pada PCR membolehkan untuk mendedahkan jangkitan tersebut:

Bahan ujian untuk PCR biasanya dahak, air liur, air kencing, dan darah. Sebelum analisis, anda mesti berhati-hati mempersiapkannya, setelah menerima perundingan awal dengan doktor.

Darah untuk PCR biasanya diberikan pada perut kosong. Keputusan yang baik menunjukkan analisis apabila bahan untuk kajian diambil dari terusan serviks atau uretra. Dalam kes ini, adalah yang terbaik untuk melakukan diagnostik PCR tidak lewat daripada satu hari selepas bersetubuh.

Varieti PCR

PCR digunakan dalam banyak bidang untuk analisis dan eksperimen saintifik. Terdapat kaedah analisis yang berbeza:

  1. Transkripsi transkripsi PCR (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (Bahasa Inggeris)) digunakan untuk menguatkan, mengasingkan atau mengenal pasti urutan yang diketahui dari pustaka RNA.
  2. PCR terbalik (Inverse PCR (Eng.)) - digunakan jika hanya sebahagian kecil diketahui dalam urutan yang dikehendaki. Kaedah ini amat berguna apabila perlu menentukan urutan bersebelahan selepas penyisipan DNA ke dalam genom.
  3. PCR bersarang (Nested PCR) digunakan untuk mengurangkan bilangan produk sampingan tindak balas. Dua pasang primer digunakan dan dua tindak balas berturut-turut dilakukan.
  4. Asimetri PCR (Asimetri PCR) dilakukan apabila perlu untuk menguatkan terutamanya salah satu rangkaian DNA asal. Digunakan dalam beberapa ujian penjujukan dan hibridisasi.
  5. PCR kuantitatif (PCR kuantitatif, Q-PCR (Eng.)) Atau PCR masa nyata digunakan untuk memantau secara langsung pengukuran jumlah produk PCR tertentu dalam setiap kitaran tindak balas.
  6. Langkah PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - dengan menggunakan pendekatan ini, mengurangkan kesan pengikatan tidak spesifik.
  7. PCR khusus kumpulan (PCR khusus kumpulan) - PCR untuk urutan yang berkaitan dalam satu atau antara spesies yang berbeza, menggunakan primers konservatif untuk urutan ini.

Sekiranya urutan nukleotida matriks adalah sebahagian atau tidak diketahui, adalah mungkin untuk menggunakan primer yang merosot, urutan yang mengandungi kedudukan merosot di mana setiap pangkalan boleh ditempatkan. Sebagai contoh, urutan primer mungkin:... ATH..., di mana H ialah A, T, atau C.

Apakah bahan biologi yang sedang disiasat?

Bahan untuk kajian PCR, di mana DNA bakteria asing dapat dikesan atau DNA atau RNA virus, dapat terdiri dari berbagai media biologi dan cairan manusia:

  1. Urin. Ia boleh digunakan untuk jangkitan saluran urogenital pada lelaki dan organ kencing pada wanita (pada lelaki, penggunaan air kencing sebagai bahan menggantikan epitel mengikis).
  2. Kahak. Ia digunakan untuk mendiagnosis tuberkulosis dan kurang kerap untuk mendiagnosis bentuk pernafasan klamidia dan mycoplasmosis. Uap dalam jumlah 15-20 ml dikumpulkan dalam botol steril (buang).
  3. Cecair biologi. Jus prostat, pleura, cerebrospinal, amniotik, cecair artikular, bronchoalveolar lavage, air liur diambil mengikut petunjuk.
  4. Pengikisan epitel daripada membran mukus. Lazimnya digunakan untuk mendiagnosis penyakit menular seksual (STD), seperti gonorea, klamidia, mycoplasmosis, ureaplasmosis, trikomoniasis, gardnerellezis, herpetic dan jangkitan lain yang mempengaruhi membran mukus.
  5. Biopsi. Biopsi perut dan duodenum yang paling biasa digunakan untuk mengenal pasti jangkitan Helicobacter pylori.
  6. Darah, plasma, serum. Digunakan untuk analisis PCR terhadap virus hepatitis B, C, D, G, herpes, CMV, HIV, gen manusia.

Bagaimana untuk menyediakan analisis?

Kebolehpercayaan hasil PCR secara langsung bergantung kepada ketepatan penyampaian bahan untuk pemeriksaan. Bahan tidak boleh tercemar, jika tidak hasil kajiannya tidak akan menjadi objektif. Cadangan yang paling penting sebelum menghantar analisis PCR adalah keperluan berikut:

  1. Urine dihantar pada waktu pagi di dalam bekas steril.
  2. Ujian darah untuk jangkitan mesti diambil pada perut kosong pada waktu pagi.
  3. Ia tidak perlu menunjukkan aktiviti seksual hari sebelum analisis.

Hasil analisis akan siap dalam masa 1.5-2 hari selepas prosedur. Terdapat situasi seperti itu apabila hasilnya dapat disiapkan pada hari yang sama.

Mengekodkan analisis CRP

Proses penafsiran penyelidikan yang dibentangkan dibezakan dengan kesederhanaannya. Hasil analisis PCR dapat diperoleh dalam waktu 1.5-2x hari setelah penyerahan bahan. Dalam beberapa kes, hasilnya siap pada hari pertama, dan inilah yang dapat mereka maksudkan:

  • Hasil negatif menunjukkan bahawa agen yang menular hilang dalam bahan yang didiagnosis.
  • Pcr positif bermakna DNA atau RNA patogen ada di dalam tubuh manusia.

Dalam beberapa kes, menghasilkan penentuan kuantitatif mikroorganisma. Ini terutama berlaku untuk penyakit yang disebabkan oleh mikroorganisma oportunistik. Oleh kerana bakteria ini menunjukkan kesan negatif mereka hanya dengan jumlah yang berlebihan.

Juga, analisis kuantitatif PCR adalah penting untuk pilihan taktik terapi dan untuk mengawal rawatan jangkitan virus seperti virus HIV dan hepatitis.

Seberapa tepat diagnosis PCR jangkitan?

Kaedah PCR dicirikan oleh ketepatan tinggi, kekhususan dan kepekaan. Ini bermakna analisis ini mampu:

  • tepat menentukan kehadiran atau ketiadaan jangkitan;
  • nyatakan jenis jangkitan (kekhususan);
  • mengesan jangkitan walaupun dengan kandungan DNA sangat rendah mikrob dalam bahan biologi,
  • yang telah tertakluk kepada penyelidikan (kepekaan).

Analisis PCR: harga dan masa

Harga analisis spesifik bergantung kepada jangkitan yang anda periksa. Anggaran harga dan terma:

  1. STI: 300-500 rubel, masa - 1 hari;
  2. Epstein-Barr virus, manusia papillomavirus, virus herpes, sitomegalovirus: 300-500 rubles, istilah - 1 hari;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: analisis kualitatif sebanyak 650 rubles, analisis kuantitatif 2000 rubles. Terma - sehingga 5 hari;
  4. Antibodi kepada virus hepatitis C, jumlah (Anti-HCV) - 420 rubel;
  5. Antibodi kepada virus hepatitis C, IgM (IgM Anti-HCV) - 420 rubel;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubel, istilah - 1 hari;
  7. HIV (antibodi dan antigen) - 380 rubel;
  8. RNA HIV, secara kualitatif - 3,500 rubel;
  9. RNA HIV, secara kuantitatif - 11,000 rubel.

Untuk menjimatkan wang, anda boleh memilih kumpulan analisis yang tetap. Perkhidmatan ini disediakan oleh majoriti klinik di mana ia mungkin untuk lulus analisis oleh kaedah ERP (invitro, onklinik, dll.).

Diagnosis tuberkulosis PCR

Tuberkulosis adalah jangkitan khusus, tumpuannya mungkin dalam tisu manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronik yang rejimen rawatan yang optimum sukar dipilih. Salah satu sebab untuk ini adalah diagnosis lewat, ketika mycobacteria, ketika di dalam tubuh manusia, telah disesuaikan dengan banyak ubat.

Apakah kaedah diagnosis moden yang ada? Diagnostik PCR - apa itu? Bagaimana kajian ini dilakukan? Dalam kes yang mana tuberkulosis didiagnosis dengan kaedah ini dan apakah intipatinya?

Apakah diagnostik PCR?

Ini adalah salah satu kaedah yang paling moden untuk mendiagnosis bukan sahaja penyakit, tetapi juga pengesanan bahan biologi. Diagnostik PCR dicipta baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mencadangkan skim pemulihan kompleks untuk bahan biologi mikroorganisma dalam satu segmen pendek. Terima kasih kepada penemuannya, saintis itu dianugerahkan anugerah tertinggi - Hadiah Nobel.

Apakah itu - diagnosis PCR jangkitan? Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah diagnosis pengesanan penyakit virus, berdasarkan kaedah kejuruteraan genetik. Ia digunakan secara meluas dalam mikrobiologi perubatan, imunologi dan virologi. Kaedah ini universal dan membantu membuat diagnosis dengan sedikit bahan. Jangkitan dapat dikesan secara literal pada jam pertama jangkitan dengannya, jauh sebelum gejala penyakit pertama muncul.

Kaedah ini terdiri daripada mendapatkan dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi serpihan genom (zarah DNA), biosintesisnya dengan penentuan selanjutnya untuk kelas mikroorganisma yang diperolehi daripada bahan genetik yang dimiliki melalui kaedah genetik molekul.

Walaupun ia adalah proses yang kompleks, ia mengambil masa yang lebih sedikit daripada banyak kaedah biologi mengesan agen berjangkit. Dalam masa beberapa jam, mikroorganisma boleh dikesan oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengasingkannya dari persekitaran (darah, cecair cerebrospinal, dahak) dan membesar untuk masa yang lama pada media nutrien tiruan. Adalah cukup bahawa serpihan kecil benang DNA agen berjangkit hadir dalam bahan yang sedang dipelajari.

Asas tindak balas adalah kemungkinan di bawah keadaan buatan (in vitro) untuk menghasilkan sintesis molekul asid nukleus agen berjangkit.

Apa yang diperlukan untuk PCR?

  1. Primer adalah segmen DNA yang mana biosintesis atau penciptaan bermula.
  2. Nukleotida atau sebatian kompleks yang merupakan asas molekul DNA atau RNA.
  3. Tindak balas rantai polimerase tidak mungkin tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahap diagnostik PCR

Bagaimanakah diagnosis molekul dilakukan oleh PCR? Prosedur ini mudah dan mengambil masa yang singkat, dengan mengambil kira pengumpulan bahan.

  1. Sebelum memulakan kajian, mereka mengambil bahan biologi yang diperlukan - ini adalah air basuh bronkial, darah, kandungan lambung, dahak. Jenis bahan biologi bergantung kepada patogen yang disyaki.
  2. Denaturasi atau pemusnahan struktur utama DNA, yang terdiri daripada dua rantai. Intipati tahap ini adalah untuk memisahkan dua rantai di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang tidak berlangsung lebih dari dua minit).
  3. Pada tahap berikutnya PCR, dipanggil penyepuhlindapan, suhu dikurangkan dengan beberapa darjah supaya primer akan terikat pada helai DNA.
  4. Pemanjangan, di mana sintesis molekul yang dikehendaki berlaku secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 kitaran sedemikian menerima bilangan salinan DNA mikroorganisma yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Adakah PCR memerlukan diagnosis tuberkulosis?

Tidak mungkin benar-benar semua orang yang disyaki menggunakan tuberkulosis untuk melakukan PCR, kerana kaedah ini memerlukan peralatan mahal. Tidak semua klinik awam mampu membelinya. Di samping itu, ia berlaku bahawa kaedah biasa mendiagnosis jangkitan dalam kebanyakan kes juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

  • tinjauan pesakit, pengambilan sejarah;
  • pemeriksaan penuh orang itu;
  • satu kajian menggunakan ujian tuberkulin Mantoux;
  • radiografi atau fluorografi;
  • diagnostik komputer jika perlu;
  • Kaedah penyelidikan mikrobiologi: mikroskopi smear dan pemeriksaan bacteriological sputum.

PCR untuk tuberkulosis dilakukan dalam kes-kes khas apabila sukar untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk menjalankan kaedah instrumental lain.

Walaupun terdapat banyak kaedah diagnostik, kejadian tuberkulosis terus berkembang. Pada masa ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga ciri-ciri lain:

  • penyakit ini sering berlaku dalam bentuk yang teruk;
  • bilangan kes maut meningkat;
  • semakin tahan terhadap kemoterapi moden didiagnosis bentuk penyakit.

Kehadiran rakyat sendiri menjalani pemeriksaan kesihatan rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi menyebabkan penyebaran tuberkulosis. Dalam keadaan sedemikian, kita memerlukan kaedah penyelidikan yang cepat, bermaklumat dan berkesan yang boleh diakses oleh kanak-kanak dan orang dewasa. Semua kaedah diagnostik di atas adalah lebih rendah daripada PCR.

Faedah mendiagnosis batuk kering dengan PCR

Penyelidikan ini, walaupun baru, telah terbukti dengan baik, terutamanya dalam kes-kes kontroversi di mana mustahil untuk membuat diagnosis untuk beberapa sebab.

Terima kasih kepada PCR, lebih mudah untuk mengesan agen penyebab tuberkulosis dalam bahan ujian.

Kelebihan diagnostik PCR adalah seperti berikut.

  1. Ini adalah analisis cepat. Serpihan kecil molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi kecemasan ketika, misalnya, sebelum operasi diperlukan untuk menentukan apakah seseorang sakit tuberkulosis.
  2. Analisis PCR dibenarkan dalam kes apabila kaedah lain tidak tersedia atau dilarang (untuk pengesanan tuberkulosis pulmonari, kadang-kadang anda perlu mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan menjadi dos radiasi yang besar).
  3. Dengan bantuan PCR, sebarang persekitaran biologi diperiksa untuk kehadiran patogen di dalamnya. Sebagai contoh, anda boleh menjalankan kajian cecair serebrospinal, jika terdapat kecurigaan terhadap meningitis tuberkulosis.
  4. Mengizinkan diagnosis PCR penyakit berjangkit pada kanak-kanak, kerana kaedahnya selamat.
  5. Membolehkan anda mengenal pasti patogen di mana-mana peringkat penyakit ini.
  6. Kepekaan tinggi PCR memungkinkan untuk mengesan Mycobacterium tuberculosis, walaupun terdapat hanya beberapa mikroorganisma dalam bahan biologi.
  7. Adalah baik untuk menjalankan diagnosis penyakit berulang.

Selepas semua PCR yang dibaca seolah-olah menjadi kaedah diagnostik yang hampir sempurna, yang sepatutnya membuat setiap orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kelemahan di sini, mereka mesti diambil kira.

Kelemahan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Di zaman kita, diagnostik sedemikian lebih jarang daripada keteraturan. Dan untuk ini terdapat sebab.

  1. Ini adalah kaedah penyelidikan yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak hadir kerana kos yang tinggi, tetapi analisis masih boleh dilakukan di makmal berbayar.
  2. Sejurus selepas rawatan, mycobacteria mati atau hidup dalam kuantiti yang kecil mungkin masih terdapat di dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif semasa diagnosis PCR), jadi kaedah ini tidak boleh dipercayai pada masa ini, tidak masuk akal untuk melaksanakannya.
  3. Mutasi mycobacteria mengakibatkan PCR tidak berkesan - urutan serai DNA biasa tidak dapat disintesis.
  4. Ia adalah perlu untuk memilih persekitaran yang sesuai untuk kajian ini, darah diambil hanya jika ia disyaki dijangkiti (sepsis), tidak perlu mengambil dahak jika ada persoalan tuberkulosis organ-organ sistem saraf. Dalam kes ini, PCR tidak dapat mengesan patogen dan diagnosis akan menjadi tidak diketahui.

Petunjuk untuk mengesan batuk kering menggunakan analisis PCR

Diagnosis tuberkulosis PCR paling kerap dilakukan dalam kes kontroversi. Bilakah doktor merujuk kajian ini?

  1. Sekiranya sukar untuk membuat diagnosis menggunakan kaedah yang sedia ada, tetapi ada hubungan dengan pesakit dengan tuberkulosis.
  2. Dalam kes apabila seseorang tidak dapat dihantar ke klinik untuk menjalani ujian rutin rutin untuk tuberkulosis, lebih mudah untuk memeriksa dia menggunakan PCR, memandangkan sputum untuk ujian boleh dihantar ke dalam balang dan diagnosis disahkan dalam masa beberapa jam.
  3. Sekiranya seseorang akan menjalani operasi kecemasan dan ia perlu mengetahui sama ada dia sakit dengan tuberkulosis.
  4. Sekiranya perlu, wanita hamil juga lebih baik untuk memeriksa tuberkulosis menggunakan PCR, kerana kaedahnya adalah selamat.
  5. Secara berbayar, sesiapa yang belum didiagnosis dengan tuberkulosis telah disahkan menggunakan kaedah bacteriological dan fluoroscopy. Ini berlaku apabila luka di paru-paru tidak dapat dilihat dalam imej langsung, dan orang semasa penghantaran sputum untuk kajian itu tidak dapat mengikuti cadangan untuk pengumpulan bahan yang betul. Dalam kes ini, orang itu bimbang dengan semua ciri-ciri gejala batuk kering pulmonari.
  6. Apabila terdapat keraguan tentang hasil ujian Mantoux.
  7. Adalah lebih baik untuk melakukan diagnosis tuberkulosis PCR pada kanak-kanak. Prosedur ini selamat, tidak membuat pendedahan radiasi tambahan, dan berkesan dalam mengesan sukar untuk mendiagnosis bentuk penyakit.

Diagnosis tuberkulosis tepat pada masanya adalah kunci kepada rawatan yang ditetapkan dengan betul dan mengurangkan penyebaran penyakit. Selalunya, kaedah pengesanan penyakit biasa tidak selalu berkesan. Oleh itu, PCR hari ini adalah salah satu cara yang paling boleh dipercayai dan selamat untuk mengesan jangkitan pada peringkat awal perkembangannya.

Analisis PCR

PCR (tindak balas rantai polimerase) adalah kaedah yang paling cepat dan paling dipercayai untuk mendiagnosis penyakit berjangkit.

Prinsip kaedah tindak balas rantai polimerase telah dibangunkan oleh Kary Mullis pada tahun 1983. Untuk penemuannya, K. Mullis pada tahun 1993 menerima Hadiah Nobel dalam Kimia.

Kaedah PCR membolehkan untuk mencapai peningkatan ketara dalam kepekatan kecil fragmen asid nukleik tertentu (DNA) dalam bahan biologi (sampel). Kaedah ini didasarkan pada pelbagai penyalinan selektif (amplifikasi) seksyen tertentu DNA menggunakan enzim di bawah keadaan buatan.

Kelebihan kaedah diagnostik PCR sebagai kaedah diagnostik untuk penyakit berjangkit

Pengesanan langsung patogen

Banyak kaedah diagnostik tradisional, seperti enzim immunoassay, mengesan penanda protein yang merupakan produk aktiviti penting agen berjangkit, yang memberikan bukti tidak langsung tentang kehadiran jangkitan. Pengenalpastian rantaian DNA patogen spesifik oleh kaedah PCR memberikan petunjuk langsung kehadiran patogen.

Kekhususan yang tinggi

Kekhususan tinggi dari kaedah PCR adalah disebabkan oleh fakta bahawa pecahan DNA unik dikesan dalam bahan di bawah kajian. Kekhususan ditentukan oleh urutan nukleotida primer, yang tidak termasuk kemungkinan mendapatkan hasil palsu, berbanding kaedah analisis imunologi, di mana kesilapan yang berkaitan dengan antigen balas bertindak balas adalah kerap.

Kepekaan yang tinggi

Kaedah PCR membolehkan untuk mengesan sel tunggal bakteria atau virus. Analisis PCR mendedahkan kehadiran patogen penyakit berjangkit dalam kes di mana kaedah lain (imunologi, bakteriologi, mikroskopik) tidak dapat melakukan ini. Kepekaan analisis PCR adalah 10-100 sel setiap sampel (sensitiviti ujian imunologi dan mikroskopik adalah 103-105 sel).

Universaliti prosedur untuk mengesan pelbagai patogen

Bahan untuk kajian oleh PCR adalah DNA patogen. Kaedah ini didasarkan pada pengesanan fragmen DNA atau RNA yang khusus untuk organisma tertentu. Kesamaan komposisi kimia semua asid nukleik membolehkan penggunaan kaedah penyelidikan makmal bersatu. Ini memungkinkan untuk mendiagnosis beberapa patogen daripada satu bioassay.

Kadar hasil analisis yang tinggi

Untuk analisis PCR, pengasingan dan penanaman budaya patogen tidak diperlukan, yang memerlukan banyak masa. Kaedah terpadu pemprosesan biomaterial dan pengesanan produk tindak balas dan proses penguatkuasaan automasi memungkinkan untuk menjalankan analisis lengkap dalam 4-5 jam.

Keupayaan untuk mendiagnosis bukan sahaja jangkitan akut tetapi juga laten

Kaedah PCR sangat berkesan untuk mendiagnosis bentuk-bentuk mikroorganisma yang sukar ditanam, tidak ditanam dan berterusan yang sering dijumpai dalam jangkitan laten dan kronik, kerana kaedah ini mengelakkan kesulitan yang berkaitan dengan pertumbuhan mikroorganisma seperti di makmal. Penggunaan diagnostik PCR juga sangat berkesan terhadap patogen yang mempunyai variasi antigenik tinggi dan parasit intrasel.

Seberapa berkesan pengujian dahak untuk tuberkulosis oleh PCR?

Untuk mengenalpasti batang Koch pada manusia, kaedah diagnostik yang berbeza digunakan. Terima kasih kepadanya, patologi itu dapat dikesan walaupun di peringkat awal, yang meningkatkan peluang pesakit untuk pemulihan. Analisis sputum untuk tuberkulosis adalah teknik yang paling dihargai dan agak berkesan. Apakah itu dan sejauh manakah kos analisis tersebut?

Apakah analisis kuman oleh PCR?

PCR bermaksud tindak balas rantai polimerase. Kaedah ini berkesan terhadap penyakit berjangkit. Untuk menubuhkan diagnosis yang jelas, anda tidak perlu mengumpul sejumlah besar biomaterial dan menunggu masa yang lama, seperti dalam hal penebaran sputum.

Kaedah ini didasarkan pada mendapatkan DNA zarah mikroorganisma. Selanjutnya, penyelidikan genetik molekul akan menentukan jenis mikroorganisma yang seharusnya termasuk bahan yang ada. Di bawah keadaan tiub ujian, pakar akan mensintesis molekul bakteria dan membuat kesimpulan yang sesuai dalam beberapa jam.

Keberkesanan

Analisis sputum untuk Mycobacterium tuberculosis adalah berkesan apabila tongkat Koch telah melanda sistem pernafasan. Dalam kes ini, penyakit ini dapat dikenal pasti dengan mudah, walaupun pada jam pertama jangkitan.

Tetapi, analisis dahak tidak akan menunjukkan hasil yang boleh dipercayai jika tuberkulosis hadir:

  • tulang;
  • otak, saraf tunjang;
  • sistem saraf;
  • sendi, dsb.

Phthisiatrician akan dapat menentukan jenis penyakit, dengan mengambil kira gejala-gejala sekarang dan bergantung pada hasil analisis umum dan lain-lain.

Ia juga tidak sesuai untuk kaedah penyelidikan sedemikian apabila anda perlu menjalankan analisis kawalan selepas rawatan terapeutik penyakit ini. Hasilnya akan positif, seperti dalam tubuh, dalam apa jua keadaan, masih ada IBC hidup atau mati. Adalah lebih baik untuk memberi keutamaan kepada prosedur diagnostik yang lain.

Kontra dengan kaedah ini

Oleh itu, tidak ada contraindications untuk ujian dada untuk batuk kering menggunakan PCR. Terdapat batasan. Seperti yang disebutkan di atas, tidak perlu melakukan itu selepas rawatan batuk kering. Hasilnya tidak berguna. Di sini adalah wajar untuk menggunakan diagnosis yang berbeza.

Di samping itu, tiada halangan lain untuk diagnosis ini. Sputum boleh diperiksa dalam kategori umur dan untuk sebarang penyakit yang berkaitan. Sekalipun tidak terdapat pembebasan dahak yang berlimpah, analisis dapat dilakukan dengan mengambil lendir menggunakan bronkoskopi.

Faedah

Dalam kaedah ini, jisim plus, ini termasuk:

  1. Kepelbagaian dan kepekaan yang tinggi. Hanya agen penyebab tuberkulosis dikesan. Tidak boleh ada jawapan palsu jika semua nuansa prosedur itu diambil kira. Mycobacteria dikesan walaupun nombor minimum mereka. Walaupun terdapat 10 sel yang tidak normal dalam bahan yang dikumpul, jangkitan akan dikesan.
  2. Kelajuan mendapat jawapan. Berapa banyak analisis yang dilakukan? Selepas 3-5 jam, anda boleh mendapatkan hasilnya. Tidak perlu melakukan budaya dahak untuk tuberkulosis, dan ini mengurangkan masa.
  3. Anda boleh mengenal pasti sebagai jangkitan tersembunyi, dan yang dalam bentuk akut.
  4. Tiada contraindications mutlak. Ini memungkinkan untuk melaksanakan prosedur untuk semua orang tanpa pengecualian (walaupun untuk kanak-kanak kecil), dan terutama apabila kaedah lain tidak dapat diselesaikan.
  5. Dengan bantuan diagnostik PCR, pelbagai biomaterial (air kencing, najis, darah, air liur, cecair cerebrospinal, dll) dipelajari.
  6. Kaedah mendedahkan tuberkulosis pada peringkat awal, pada jam pertama selepas jangkitan.
kepada kandungan ↑

Kelemahan

Selain sisi positif, ada juga yang negatif. Ini adalah:

  1. Analisis PCR adalah "keseronokan" yang mahal. Di samping itu, peralatan yang diperlukan untuk pelaksanaannya tidak terdapat di setiap pusat perubatan. Di klinik, jarang terdapat, kerana nilainya juga hebat. Jika kita bercakap mengenai klinik swasta, maka ya, anda boleh mencari diagnosis jenis ini. Biarkan dirinya, sayangnya, tidak boleh semua orang.
  2. Ia menunjukkan hasil positif yang salah pada orang-orang yang baru-baru ini menjalani rawatan tuberkulosis.
  3. Sekiranya MBC bermutasi, kaedah ini juga boleh memberikan hasil palsu.
  4. Sekiranya bahan dikumpulkan dengan tidak betul, atau pakar yang menjalankan penyelidikan tidak mempunyai tahap kelayakan, maka kemungkinan kerosakan juga mungkin. Dalam beberapa kes, prosedur itu perlu diulang beberapa kali dan setiap kali pembayaran diulang.
kepada kandungan ↑

Penyediaan untuk analisis

Agar bahan menjadi berkualiti tinggi, mestilah dipasang dengan betul dan bersedia untuknya dengan betul.

Ada peraturan tertentu untuk mengumpul dahak untuk tuberkulosis. Algoritma tindakan adalah seperti berikut:

  1. Walaupun pada waktu malam, pada waktu petang seseorang perlu minum ekspektoran (jika dahak bergerak buruk). Walaupun ia tidak membantu, penyedutan harus dilakukan berdasarkan ubat pengedaran dan ekspektoran ubat. Sekiranya tiada sputum, pesakit disasarkan kepada bronkoskopi. Ia adalah semasa prosedur ini diambil bahan untuk kajian ini.
  2. Beli bekas khas terlebih dahulu. Ia steril dan kedap udara, jadi tidak ada tambahan yang boleh diletakkan di sana, serta dibuka terlebih dahulu.
  3. Bilik di mana kuman akan dikumpulkan harus berventilasi dengan baik. Ia perlu membuka tingkap, pintu, menghidupkan tudung. Satu lagi pilihan yang baik adalah untuk mendapatkan udara segar (misalnya, ke balkoni atau ke halaman).
  4. Seketika sebelum prosedur, anda perlu memberi amaran kepada semua orang agar tiada sesiapa memasuki bilik di mana segala-galanya akan berlaku. Tidak perlu ada mikrofon tambahan dalam biomaterial - ini penting.
  5. Makan sebelum memilih tidak digalakkan.
  6. Mulut dan tekak dibilas.
  7. Air liur meludah. Kapasitinya harus jatuh minimum.
  8. Dengan batuk, seseorang mengambil tongos keluar dan meludah ke dalam bekas yang disediakan. Selepas prosedur, tutup penutup dengan ketat dan ambil sampel ke makmal.

Cara mengumpul dahak harus memberitahu doktor. Sekiranya pesakit tidak berani melakukannya sendiri, maka pekerja kesihatan datang untuk menyelamatkannya. Semasa manipulasi, mereka memakai topeng pelindung khas. Kumpulkan sputum akan berada di bilik khas, di mana tidak ada cara untuk orang asing. Jika pesakit tidak dapat datang ke klinik, pakar datang ke rumahnya dan membantu mengumpul lendir.

Jika bronkoskopi dilakukan, pesakit disuntik ke dalam trakea dengan peranti - bronkoskop. Ia adalah dengan bantuannya bahawa bahan itu diambil.

Untuk kebolehpercayaan, disarankan untuk lulus analisis tiga kali, iaitu:

  • pada waktu pagi di perut kosong;
  • selepas pertama kali selepas 4-5 jam;
  • 24 jam selepas kajian pertama dan juga sebelum makan.
kepada kandungan ↑

Bagaimana analisis ini dilakukan?

Melalui ujian sputum untuk tuberkulosis hanya sebahagian daripada pekerjaan. Utama di hadapan. Banyak bergantung pada bagaimana mempersiapkan pakar.

Kursus kajian ini adalah seperti berikut:

  1. Pakar ini meneruskan pemusnahan struktur utama DNA (denaturation). Terdapat dua rantai di sini. Pada suhu tinggi, mereka dipisahkan.
  2. Pada peringkat seterusnya, suhu dikurangkan (anil). Ini adalah perlu untuk sambungan sambungan DNA dengan primer.
  3. Peringkat ketiga adalah pemanjangan. Di sini, molekul-molekul yang diperlukan disintesis.
kepada kandungan ↑

Keputusan penyahkodan

Mycobacterium tuberculosis dalam dada oleh PCR boleh dikesan atau tidak. Hasil positif adalah berdasarkan hakikat bahawa terdapat Koch melekat DNA dalam biomaterial. Ini menunjukkan bahawa orang itu dijangkiti. Dengan negatif - 98% hakikat bahawa subjek tidak dijangkiti.

Petunjuk boleh diadili pada:

  • fasa patologi (laten atau aktif);
  • berapa banyak badan terjejas;
  • sama ada rawatan yang dipilih adalah berkesan dalam kes tertentu.

Perlu diingat bahawa tiada apa-apa yang menyeluruh. Oleh itu, mungkin terdapat hasil positif palsu atau palsu. Untuk memastikan ketepatannya, prosedur diagnostik lain disyorkan atau PCR dilakukan dua kali (tiga kali).

Analisis kos di pusat-pusat yang berbeza

Anda boleh memberi dahaga untuk PCR di klinik yang berbeza. Marilah kita memberi contoh beberapa pusat Moscow yang popular dengan dasar harga.

Kaedah untuk ujian sputum untuk batuk kering

Analisis sputum untuk tuberkulosis dimasukkan dalam set langkah diagnostik yang diperlukan untuk mengenal pasti dan menjelaskan diagnosis. Kandungan sputum akan membantu membuat rejimen rawatan yang kompeten.

Bagaimana untuk melepasi ujian dahak untuk tuberkulosis

Doktor telah membuat peraturan untuk mengambil analisis. Air liur dikumpulkan pada waktu pagi, sebelum orang itu telah sarapan pagi. Pertama, pesakit melakukan prosedur kebersihan:

  • pembersihan enamel gigi;
  • bilas dengan air bersih rongga mulut dan pharynx.

Kemudian memulakan penyerahan segera bahan untuk analisis. Bagaimana untuk lulus ujian dada? Keperluan untuk prosedur:

  1. Persediaan bermula lebih awal, pada waktu petang. Pesakit digalakkan mengambil ubat khas yang akan membuat rembesan pulmonari lebih semula jadi. Ini adalah ekspektoran dan penipisan sebatian. Jika prosedur sedemikian tidak membantu, lakukan penyedutan dengan komposisi farmaseutikal untuk pendedahan.
  2. Sediakan bekas untuk dahagakan. Mucus perlu dikumpulkan dalam hidangan steril, tutup rapat, ketat.
  3. Sebelum bersalin, batuk dan meludah dalam bekas. Jumlah air liur tidak boleh besar, ia memerlukan dahak dari laring. Bakteria rongga mulut adalah luaran dalam analisis.
  4. Kumpulkan air liur di dalam bilik dengan pengudaraan yang sangat baik. Analisis dilakukan dengan membuka transom, menjalankan hud. Adalah dinasihatkan untuk membuka tingkap, atau keluar ke udara segar.

Semasa prosedur di dalam bilik dilarang masuk. Orang luar boleh menyumbang kepada mikroflora pejabat, dan dengan itu, untuk pembedahan, pembentukan patologi. Pekerja perubatan menerima analisis dalam topeng khas (respirator).

Analisis sputum untuk transkrip tuberkulosis

Pengekodan bermula dengan melihat rupa lendir. Patologi mencirikan perubahan warna - menjadi gelap, dengan penambahan darah yang jelas. Warna bukan penunjuk utama. Sputum menjadi gelap dari minum wain merah, semangat kopi. Sesetengah ubat dan minuman berwarna mengubah rupa lendir.

Bahan yang dikumpul diuraikan oleh dua indikator, iaitu, doktor memperoleh dua hasil:

Jawapan positif

Analisis sputum yang dihasilkan mengesahkan kehadiran penyakit dalam badan. Yang mengesahkan ini:

  • perkara asing atau kemasukan yang tidak diketahui;
  • kehadiran gumpalan lendir;
  • garis-garis yang kelihatan;
  • bau yang tidak murni atau berjangkit;
  • nanah.

Kaedah penyelidikan makroskopik menyediakan data lain:

  • convolutions fibrinous;
  • Pembentukan tongkat kanta koch;
  • produk daripada penguraian penguraian bahan bakteria;
  • sisa proses patologi dalam tisu paru-paru.

Hasil positif menunjukkan peningkatan jumlah sebatian protein. Ia mencapai 100-120g / l.

Kaedah mikroskopik lain memungkinkan untuk mengenal pasti elemen berbahaya yang lain:

  • makrofaj alveolar;
  • komposisi leukosit yang terlalu tinggi;
  • kadar limfosit yang tinggi.

Untuk batuk kering, seseorang sering cuba meludah keluar dari mulutnya. Hemoptisis meningkatkan pembentukan sel darah merah. Jumlah air liur di mulut adalah sedemikian rupa sehingga seseorang tidak dapat menelannya tanpa melihatnya. Lebih dari pada keadaan yang sihat.

Jawapan negatif

Kajian menunjukkan bahawa jumlah leukosit kecil, sesuai dengan norma. Mikrobacteria juga tidak dikesan. Sekiranya pesakit berasa tidak sihat, maka pakar akan menetapkan peperiksaan tambahan. Ada kemungkinan penyakit ini dikaitkan dengan penyakit paru-paru. Jenis dan kaedah diagnostik tambahan bergantung kepada gejala dan keadaan pesakit.

Bagaimana kajian lendir

Tuberkulosis adalah kesan patologi berbahaya pada tisu paru-paru, pemisahan mereka diperhatikan. Analisis dilakukan dengan beberapa kaedah. Yang paling biasa - ELISA (immunoassay). Intipati kaedah:

  1. Antibodi ditambah kepada penyelesaian di mana sebahagian daripada sputum diletakkan.
  2. Semak konsentrasi antigen, berbanding dengan norma badan yang sihat.
  3. Tentukan aktiviti persekitaran patologi.
  4. Diagnosis.

Versi kedua penyelidikan makmal adalah WASTES. Untuk kaedah mengambil peralatan perubatan khas. Intipati penyelidikan perkakasan:

  1. Di dalam mikrojekan yang disuntikkan untuk jenis jangkitan yang dimaksudkan.
  2. Radas mula berkembang pada strain bakteria tertentu.
  3. Karbon dioksida dihasilkan dalam proses, dan sensor mengambilnya.
  4. Gas menggabungkan dengan pewarna.
  5. Pada indeks pendarfluor membuat kesimpulan tentang jenis penyakit.

Cara paling mudah adalah kebudayaan. Pankre yang ditaburkan dalam persekitaran khas. Doktor meneliti jenis-jenis koloni pembentukan mikrob. Kaedah ini adalah yang paling lama, tetapi membolehkan anda membuktikan diagnosis. Ia digunakan sangat jarang, tepat kerana jangka masa yang panjang, yang tidak selalu sesuai untuk pesakit.

Analisis sperma pcr untuk batuk kering

PCR adalah singkatan tindak balas rantaian polimerase istilah perubatan. Diagnostik adalah salah satu perkembangan saintis terkini. Ia dibuka pada tahun 1983, kepentingan penemuan dihargai di dunia, saintis menerima pengiktirafan tertinggi - Hadiah Nobel.

Kaedah ini berdasarkan penggunaan kejuruteraan genetik. Fleksibilitasnya dalam keperluan untuk sedikit bahan untuk diagnosis yang tepat. Kenal pasti jangkitan dengan tuberkulosis sebenarnya adalah pada awal jangkitan, tanpa menunggu perkembangan penyakit.

Intipati kaedah yang adalah polimerase:

  • pesakit mengambil serpihan zarah DNA;
  • menjalankan sintesis biologi bahan;
  • ditentukan oleh kelas mikroorganisma.

Prosesnya adalah teknologi yang kompleks, ia melibatkan peperiksaan genetik molekul. PCR untuk batuk kering mengambil masa beberapa jam. Masa yang diperlukan untuk kaedah lain tidak dapat dibandingkan dengannya dengan cepat. Setelah lulus analisis, pesakit sedang menunggu pengesanan agen penyebabnya. Proses yang mendasari hanya pakar boleh difahami. Orang biasa tidak memahami selok-belok kaedah.

Bagaimana diagnosis ujian tuberkulosis:

  1. Ambil bahan yang diperlukan untuk analisis. Apa yang boleh terjadi: darah, perut, dada, air, dicuci dengan bronchi.
  2. Jenis bahan dipilih bergantung kepada jenis jangkitan mungkin patogen.
  3. Langkah seterusnya ialah mengkaji hubungan rantai. Dua rantai tertakluk kepada suhu tinggi sehingga 98 darjah. Tahap ini disebut denaturation (pemusnahan rantai DNA struktur). Waktu pendedahan suhu - sehingga 2 minit.
  4. Peringkat seterusnya adalah penyepuhlindapan. Suhu dikurangkan, primer dibenarkan untuk menyambung kepada helai DNA.
  5. Akibatnya, pemanjangan berlaku - sintesis molekul yang diperlukan untuk proses itu.

Untuk apa-apa analisis, peralatan khas diperlukan. Ia mahal, jadi ia tidak terdapat di mana-mana kemudahan penjagaan kesihatan. PCR dilakukan dalam kes-kes yang sukar, apabila tidak ada hasil tepat dari kaedah diagnostik konvensional, adalah mustahil untuk menjalankan kaedah instrumental untuk memeriksa keadaan pesakit.

Kelebihan teknologi PCR:

  1. Kelajuan mendapatkan hasilnya. Kira-kira 5 jam doktor mempunyai data yang tepat. Kelajuan ini membolehkan anda membantu pesakit dalam keadaan kecemasan. Selalunya, ia adalah tempoh praoperasi.
  2. Dibenarkan apabila kaedah lain tidak boleh digunakan. Sebagai contoh, pengulangan kerap X-ray menyebabkan radiasi. PCR tidak berbahaya untuk pesakit.
  3. Anda boleh meneroka sebarang persekitaran biologi. Bentuk tuberkulosis yang rumit juga dikenalpasti.
  4. Kaedah ini selamat, oleh itu, sesuai untuk kanak-kanak.
  5. Jangkitan dikesan di mana-mana peringkat.
  6. PCR tidak membenarkan menyembunyikan walaupun sebilangan kecil pembentukan mikro bakteria.
  7. Sesuai untuk memeriksa kemungkinan berulang tuberkulosis.

Berapa banyak analisis dahak untuk batuk kering?

Sampel diambil lebih dari satu kali. Pengulangan tidak termasuk kemungkinan kesilapan atau mendapatkan bahan berkualiti rendah yang tidak mencerminkan kedudukan dan keadaan sebenar pesakit. Berapa kali untuk mengumpul dahak, beritahu doktor yang hadir. Pilihan terbaik adalah tiga kali sehari. Kadangkala sampel tambahan mungkin diperlukan. Dalam tempoh masa yang mereka kumpul:

  1. Sebelum makan pada waktu pagi.
  2. 3-4 jam selepas ujian pertama.
  3. Pada hari kedua juga sebelum makan.

Tuberculosis adalah penyakit berbahaya yang boleh menjejaskan tubuh mana-mana orang. Terdapat banyak keadaan jangkitan. Dengan sebarang kecurigaan kemungkinan jangkitan, jangan menunggu gejala yang terang. Ia perlu diuji, diperiksa dan dalam masa untuk memulakan rawatan.

Diagnosis PCR tuberkulosis pada kanak-kanak dan orang dewasa: tanda-tanda untuk

Pertubuhan Kesihatan Sedunia diiktiraf 20 tahun yang lalu bahawa kadar penyebaran tuberkulosis tidak terkawal dan mencapai skala wabak. Sejak itu, keadaan tidak bertambah baik. Lebih daripada satu juta kes penyakit itu didiagnosis setiap tahun, di mana hampir satu perempat adalah maut. Dalam dekad yang lalu, kadar kejadian di kalangan kanak-kanak telah meningkat, kebanyakan bentuk penyakit tidak meminjamkan diri kepada terapi antibiotik yang standard.

Hari ini, salah satu tugas global untuk ubat adalah pembangunan kaedah diagnostik sedemikian yang akan membolehkan untuk mengenal pasti patologi sebelum permulaan gejala klinikal yang dinyatakan. Salah satunya adalah tindak balas rantai polimerase (PCR) untuk tuberkulosis, yang membantu mengesan penyakit Koch yang menyebabkan darah, dentuman dan cecair biologi yang lain.

Diagnosis tuberkulosis

Ujian pemeriksaan bertujuan untuk mengesan pesakit, pembawa tuberkulosis dan mencegah penyebaran jangkitan dalam masyarakat. Bagi kanak-kanak di bawah umur 14 tahun, ujian Mantoux digunakan secara besar-besaran. Ini adalah ujian imunologi di mana dos tuberculin disuntik subcutaneously - gabungan kompleks bahan genetik beberapa jenis mycobacteria. Penampilan reaksi yang jelas menunjukkan proses menular yang aktif.

Untuk pemeriksaan pencegahan pada orang dewasa menggunakan fluorografi atau x-ray. Kaedah ini membantu menggambarkan lesi patologi dalam tisu paru-paru. Walau bagaimanapun, ia menyebabkan kesukaran untuk membezakan tuberkulosis daripada patologi organik lain (neoplasma malignan dan jinak, proses keradangan, pencerobohan parasit, kerosakan paru-paru profesional).

Untuk menjelaskan struktur dan saiz fokus patologi, kajian instrumental tambahan mungkin diperlukan:

  • radiografi yang disasarkan;
  • pengiraan tomografi;
  • pengimejan resonans magnetik.

Kaedah untuk diagnosis batuk kering

Dalam kes keputusan yang diragukan dan untuk pelantikan terapi yang mencukupi, terdapat keperluan untuk kaedah diagnostik yang lebih tepat yang membolehkan anda mengasingkan patogen. Pemeriksaan Mikroskopik dan bakteriologi bagi sputum digunakan untuk mengesahkan bentuk tuberkulosis paru-paru untuk masa yang lama.

Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, kejadian mycobacterium dari pelbagai organ dan sistem - buah pinggang, tulang, usus, kulit - telah menjadi lebih kerap. Untuk mengenal pasti bentuk tuberkulosis, pemeriksaan ultrasound, kencing dan feses, pemeriksaan endoskopik boleh digunakan.

Diagnosis PCR untuk tuberkulosis akan membantu mengesahkan kehadiran koch sticks dalam darah, serta kepekaannya terhadap ubat-ubatan tertentu. Ini adalah kaedah yang sangat berkesan berdasarkan pengesanan bahan genetik bakteria dalam pelbagai cecair biologi.

Spesifikasi dan petunjuk

Tindak balas rantai polimerase adalah kaedah diagnostik mikrobiologi yang sangat sensitif, yang berdasarkan prinsip-prinsip kejuruteraan genetik. Untuk mengesahkan kehadiran patogen dalam bahan biologi, cukup untuk mengesan serpihan asid nukleik yang unik untuknya. PCR untuk tuberkulosis dapat mengesan bakteria dalam darah, sputum, air kencing.

Pada masa ini, dibangunkan beberapa kaedah analisis. Yang paling popular di antara mereka adalah yang berikut:

  • PCR masa nyata;
  • teknologi mikrofluid;
  • penjujukan dan pyrosequencing.

PCR masa nyata

Makmal paling kerap menggunakan tindak balas rantai polimer masa nyata, kerana ia mengurangkan bilangan hasil positif palsu, dan proses analisis itu sendiri mengambil masa yang singkat.

Memandangkan sebilangan besar bentuk tersembunyi penyakit dan ketidakcekapan kaedah diagnostik standard, PCR semakin digunakan. Tujuan analisis ini ditunjukkan di:

  • mengenal pasti kawasan mencurigakan pada sinar-X;
  • keputusan ujian uberculin yang ragu;
  • kemustahilan melakukan analisis mikroskopik dan bakteriologi dari dahak pada orang dalam keadaan yang serius;
  • melakukan campur tangan pembedahan apabila perlu memastikan dengan cepat bahawa tidak ada jangkitan;
  • tidak dapat diterima penggunaan fluorografi, x-ray atau tomografi yang dikira (contohnya, dalam wanita mengandung dan menyusu, dalam kes pendedahan radiasi yang berlebihan);
  • disyaki batuk kering ekstrapulmonary (disyorkan bukan sahaja darah tetapi juga dahak digunakan).

Diagnosis PCR tuberkulosis telah membuktikan dirinya dalam pemeriksaan kanak-kanak, kerana kurangnya pendedahan tambahan dan keputusan pesat.

Prosedur persediaan dan analisis

Persediaan khusus untuk darah PCR tidak diperlukan. Walau bagaimanapun, untuk mengelakkan komplikasi pensampelan darah dan untuk mendapatkan bahan yang berkualiti tinggi, peraturan am berikut harus diikuti:

  • analisis perlu diambil pada waktu pagi tidak lebih awal daripada 2 jam selepas bangun;
  • Ia harus menghadkan pengambilan makanan berlemak dan goreng sehari sebelum sampel darah;
  • menahan diri dari makan, teh dan kopi selama 8-9 jam, dibenarkan minum air bersih;
  • Jangan merokok selama sekurang-kurangnya 3-4 jam.

Dalam kes ubat kekal (hormon, antikoagulan, ubat anti-radang, antibiotik, penipisan darah), anda perlu memaklumkan pembantu makmal mengenai perkara ini.

Sekiranya penghantaran sputum, anda perlu berus gigi dengan baik dan bilas mulut anda beberapa kali. Kumpulkan bahan dalam bekas steril. Untuk keputusan yang lebih baik, agen expectorant atau mucolytic boleh diambil pada waktu petang.

Diagnosis itu sendiri terdiri daripada beberapa peringkat.

    Bahan pagar. Ia boleh dilakukan di makmal dan dari jauh. Sesetengah jenis bahan yang dikumpul pesakit secara berasingan (air kencing, kahak).

Pemusnahan struktur asid nukleik (denaturasi molekul DNA dan RNA). Untuk melakukan ini, bahan ujian dipanaskan pada suhu 98 darjah dan dipegang selama beberapa minit. Akibatnya, heliks berganda melepaskan, molekul terkandas tunggal terbentuk.

  • Annealing Selepas menambah primer (seksyen pendek asid nukleik), suhu berkurangan dengan beberapa darjah, polimerase diaktifkan.
  • Elognation. Suhu dibawa ke tahap yang optimum, aktiviti enzim mencapai maksimum dan rantai kedua diselesaikan selaras dengan peraturan Chargaff yang saling melengkapi.

    • Untuk menyelesaikan kajian, diperlukan untuk mensintesis bilangan molekul DNA yang diperlukan - kira-kira 50 kitaran reaksi di atas. Ia mengambil masa kira-kira 2-3 jam. Hasil positif tindak balas tidak selalu menunjukkan tahap aktif penyakit, tetapi merupakan penunjuk kehadiran mikroorganisma dalam tubuh.

    Kelebihan dan keburukan kaedah ini

    Sebagai perbandingan dengan kaedah mikrobiologi lain, PCR tidak mengambil masa yang lama untuk mengesan Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR, hasilnya dapat diperoleh pada hari ujian.

    Satu lagi kelebihan adalah kekhususan tinggi analisis, yang memungkinkan untuk mengesan kehadiran patogen dengan ketepatan 90-95% dalam hampir mana-mana biomaterial (darah, air kencing, najis, cecair serebrospinal, sputum, bronchus flushing).

    Walau bagaimanapun, terdapat beberapa kelemahan kaedah:

    • peratusan yang agak tinggi hasil positif palsu (sehingga 15%), yang dikaitkan dengan pengesanan mikroorganisma yang tidak hidup;
    • dalam sesetengah kes, anda boleh melangkau fakta penyakit, kerana Mycobacterium tuberculosis sering tertakluk kepada mutasi dan perubahan genetiknya;
    • kecekapan rendah dalam pemeriksaan orang yang mempunyai kekurangan immunodeficiency;
    • kos penyelidikan yang tinggi, keperluan peralatan dan reagen yang mahal.

    Apa yang boleh diganti?

    Memandangkan pelbagai bentuk jangkitan tuberkulosis, untuk diagnosis yang lebih tepat dan pilihan rawatan adalah perlu untuk menggabungkan beberapa kajian diagnostik:

      Analisis mandatori untuk kanak-kanak adalah ujian Mantoux. Sekiranya pengenalan tuberculin (bahan genetik mycobacteria) berlaku reaksi yang jelas, ia boleh dijangkiti jangkitan dengan bacillus tubercle.

    Kaedah sinar-X boleh digunakan untuk menggambarkan fokus patologi. Dalam diagnosis tuberkulosis extrapulmonary, kaedah endoskopik digunakan dengan biopsi serentak:

    • bronkoskopi membantu mengenal pasti lesi-larynx, trakea, bronkus;
    • kolonoskopi - usus;
    • cystourethroscopy - organ sistem kencing;
    • histeroskopi - alat kelamin wanita. Kaedah ini tidak khusus, untuk membuat diagnosis yang tepat, patogen perlu dikenalpasti.

    Ujian klinikal umum akan membantu untuk menentukan keadaan badan yang lebih khusus. Kiraan darah lengkap dengan formula leukosit diperlukan.

    Peningkatan bilangan neutrophil dengan tahap limfosit yang dikurangkan dan peningkatan kadar sedimentasi erythrocyte (ESR) menunjukkan proses keradangan bakteria etiologi yang aktif. Mengecualikan kerosakan pada organ sistem kencing menggunakan urinalis umum dan budaya untuk kemandulan.

    PCR kini boleh didapati di kebanyakan makmal swasta. Ini memerlukan bukan sahaja pakar yang berkelayakan, tetapi juga peralatan mahal, sebilangan besar reagen. Oleh itu, penggunaan kaedah ini adalah terhad walaupun mempunyai ketepatan dan kekhususan yang tinggi.

    Kelebihan dan kekurangan PCR (a) untuk diagnosis batuk kering

    Jangkitan tuberkulosis tertentu telah wujud dalam tisu manusia dan struktur selama bertahun-tahun, dan dalam keadaan tertentu ia menyebar dengan cepat ke seluruh badan dalam 2-3 bulan. Kadang-kadang kursus terbaik rawatan sangat sukar untuk dipilih kerana diagnosis lewat dan penyesuaian patogen kepada banyak ubat-ubatan.

    Diagnosis PCR terkini tuberkulosis membantu untuk mengesan bukan sahaja penyakit yang maju, tetapi juga patogen itu sendiri, apabila tanda-tanda awal penyakit itu belum muncul.

    Apakah PCR?

    Diagnosis tuberkulosis oleh PCR telah muncul baru-baru ini. Pada tahun 1983, ahli mikrobiologi dari Amerika, Cary Mullis, mencipta satu prosedur yang mana mikroorganisma boleh dibina semula daripada bahan biologi dalam segmen pendek. Kerja ini telah menerima Hadiah Nobel.

    PCR untuk tuberkulosis adalah proses rantai polimer di mana diagnosis dan pengesanan patogen virus oleh kejuruteraan genetik. Teknik ini digunakan dalam makmal imunologi, mikrobiologi, virologi dan biokimia.

    Kaedah sejagat membantu doktor untuk mendiagnosis dan mengenalpasti proses berjangkit walaupun selepas jam pertama jangkitan, jauh sebelum timbul gejala. Penyelidikan adalah mungkin walaupun dengan sedikit biomaterial.

    Apa yang diperlukan untuk analisis?

    • Beberapa segmen DNA (primer), yang mana sintesis biologi bermula;
    • Sebatian nukleotida, asas molekul DNA atau RNA;
    • Enzim polimerase yang mempercepat analisis PCR.

    Apakah asas kaedah itu?

    Pertama, satu segmen DNA diekstrak daripada biomaterial dari orang yang dijangkiti, menggunakan kaedah biosintesis gen-molekul, jenis mikroorganisma yang mana kepunyaan biofragment ditentukan selanjutnya.

    Reaksi kompleks ini mengambil sedikit masa daripada beberapa biomethods. PCR menentukan patogen dalam beberapa jam, sementara tidak ada keperluan untuk mengasingkannya dari cecair biologi (sputum, serebrospinal atau media darah), tidak perlu membesarkannya untuk jangka masa yang panjang pada medium nutrien. Adalah cukup bahawa bahan yang dikaji mengandungi sehelai DNA patogen berjangkit.

    Apabila melakukan ujian darah PCR untuk tuberkulosis dalam vitro, sintesis asid ribonukleik tuberkulosis mycobacterium dicipta secara buatan.

    Tahap diagnosis

    Reaksi molekul oleh PCR adalah prosedur mudah yang memerlukan sedikit masa. Biomaterial yang diperlukan diambil: darah, dada, cecair penyemburan bronkial digunakan untuk menentukan tbc.

    1. Pertama, bentuk utama DNA dimusnahkan, 2 rantai dipisahkan pada suhu tinggi (maksimum 98 ° C tidak lebih daripada 2 minit);
    2. Kemudian annealing dilakukan, suhu utama dikurangkan oleh beberapa bahagian, helai DNA dikaitkan dengan primer;
    3. Peringkat seterusnya dipanggil pemanjangan, dengan biosintesis struktur molekul yang diperlukan.

    Untuk mendapatkan bilangan salinan DNA yang diperlukan, dari 25 hingga 30 kitaran mesti lulus, dan jumlah mikobakteria yang dihasilkan mudah dikenali.

    Adakah perlu melakukan PCR untuk tuberkulosis?

    Secara langsung kepada semua pesakit yang disyaki TVC, diagnostik rantaian tidak dilakukan, kerana prosedur memerlukan penggunaan peralatan mahal. Tidak semua institusi negeri perubatan membiarkannya dibeli, terutama kerana kaedah biasa mendiagnosis mycobacterium tuberculosis juga bermaklumat.

    • Berhati-hati mengambil riwayat, mempersoalkan pesakit;
    • Pemeriksaan luaran;
    • Ujian tuberkulin Mantoux;
    • Pemeriksaan radiografi atau radiografi;
    • Jika perlu, diagnostik komputer;
    • Pemeriksaan mikroskopik atau bacteriological topeng dengan sputum.

    PCR untuk tuberkulosis hanya dilakukan apabila tidak mungkin untuk melakukan analisis instrumental yang lain atau dalam keadaan yang sukar didiagnosis.

    Walaupun banyak kaedah diagnostik telah dicipta, bilangan pesakit dengan tuberkulosis terus berkembang. Di samping itu, insiden telah memperoleh beberapa ciri: bentuk penyakit yang teruk sering diperhatikan, bilangan kematian meningkat, patogen menjadi tahan terhadap ubat kemoterapi yang sedia ada.

    Ramai orang tidak mahu menjalani pemeriksaan rutin setiap tahun, menolak vaksinasi, yang membawa kepada peningkatan kejadian. Keadaan sedemikian memerlukan kaedah penyelidikan yang berkesan dan bermaklumat yang disediakan untuk orang dewasa dan kanak-kanak yang didiagnosis dengan tbc. PCR mempunyai kelebihan berbanding kaedah diagnostik lain.

    Apakah nilai kaedah?

    Penyelidikan terbaru ini telah terbukti dengan baik. Sekiranya beberapa sebab sukar untuk membuat diagnosis atau, dalam beberapa kes kontroversi, PCR mengesan bacillus tuber lebih mudah dalam bahan biologi daripada kaedah lain.

    • Kajian pesat ini, satu segmen kecil molekul yang memungkinkan untuk membuat diagnosis yang tepat dalam masa yang singkat dalam kira-kira 5 jam, ini digunakan dalam kes-kes kecemasan, sebagai contoh, sebelum campur tangan pembedahan segera;
    • Ujian darah untuk tuberkulosis adalah mungkin apabila kaedah lain tidak tersedia atau dikontraindikasikan - kadang kala untuk mengesan patogen tbc, banyak Rg-shot harus diambil, dos radiasi yang terlalu besar;
    • Menggunakan tindak balas polimerase, sebarang cecair biologi boleh diperiksa untuk kehadiran mikobakteri. Sebagai contoh, anda boleh menjalankan kajian cecair cerebrospinal dengan meningitis atau air kencing yang berbahaya dengan tuberkulosis urogenital;
    • Kaedah ini selamat, diagnosis tuberkulosis pada kanak-kanak yang menggunakan PCR tidak menyebabkan kesukaran;
    • Kaedah tindak balas polimer mendedahkan bacillus tubercle dalam sebarang bentuk dan peringkat penyakit;
    • Kehadiran hanya beberapa bakteria dalam biomaterial membolehkan anda melihat kehadiran mikroorganisma, kerana ini adalah tindak balas sensitif;
    • PCR dengan mudah meng diagnosis kambuhan penyakit ini.

    Walaupun terdapat banyak kelebihan, semua pesakit yang disyaki kajian tbc tidak dilakukan, kerana terdapat juga kekurangan, mereka juga diambil kira.

    Video

    Video - diagnosis awal

    Apakah kelemahan?

    Kaedah diagnosis ini agak luar biasa daripada alam semula jadi, kerana ini ada sebab. Pertama sekali, kos tinggi kaedah itu diambil kira. Peralatan itu mahal, klinik awam tidak mempunyai peluang untuk membeli kerana harga yang tinggi, tetapi kebanyakan makmal yang dibayar mempunyai peralatan, mereka dianalisis.

    • Kaedah mengesan bakteria mati yang telah mati selepas rawatan, sementara PCR menunjukkan hasil yang positif. Sejurus selepas kemoterapi, ia tidak masuk akal untuk menjalankan kajian, kerana hasilnya tidak boleh dipercayai;
    • Mutasi Mycobacterium tuberculosis adalah mudah terdedah, yang menyebabkan ketidakcekapan kaedah dan strand DNA tidak dapat disintesis secara konsisten.

    Persekitaran untuk kajian itu perlu dipilih dengan teliti, darah atau air kencing hanya boleh dikumpulkan jika terdapat kecurigaan jangkitan. Sputum tidak boleh diambil untuk pemeriksaan jika tuberkulosis tulang disyaki. Dalam keadaan ini, diagnosis akan menjadi tidak betul.

    Darah dan air kencing pesakit dengan tuberkulosis yang dikaji pada PCR jarang diambil, pengenalan penyakit dengan cara ini adalah dipersoalkan. Dalam media biologi, patogen ini hanya ditentukan dalam sepsis, atau dalam kes tuberkulosis yang disebarkan. Bentuk tempatan adalah yang paling biasa, dengan darah dan air kencing mereka tetap tidak berubah. Selalunya, kahak diambil untuk pemeriksaan.

    Siapa yang menunjukkan analisis?

    Kebanyakan pesakit dihantar untuk diagnosis PCR dalam kes kontroversi dan kesukaran tuberkulosis. Bilakah profesional perubatan mengemukakan rujukan untuk penyelidikan?

    1. Sekiranya ada hubungan dengan seseorang yang telah dihidapi secara diagnosis dengan tuberkulosis, tetapi sukar untuk mendiagnosis menggunakan kaedah konvensional;
    2. Dalam keadaan tersebut, jika pesakit untuk menyediakan klinik adalah mustahil untuk radiografi atau penyelidikan lain. Dalam keadaan sedemikian, lebih mudah untuk memeriksa menggunakan kaedah polimer. Analisis sputum hanya dihantar ke makmal di dalam bekas khas, dan hasilnya diketahui selepas beberapa jam;
    3. Sebelum pembedahan, sangat diperlukan untuk menentukan sama ada pesakit sakit tuberkulosis, di mana PCR ditunjukkan;
    4. Kerana keselamatan kaedah itu, mungkin melakukan kaji selidik seorang wanita hamil atau kanak-kanak, tanpa membuat beban x-ray tambahan;
    5. Keputusan ujian Mantoux yang ragu-ragu.

    Sesiapa yang ingin menjalani pemeriksaan dengan bayaran jika tuberkulosis tidak disahkan menggunakan bakteria dan fluoroskopi. Ini berlaku jika luka dalam tisu paru-paru tidak kelihatan dalam imej Rg dalam unjuran langsung, dan pesakit tidak dapat mengumpul sputum dengan betul, tetapi tanda-tanda tuberkulosis manusia terganggu.

    Tindak balas PCR moden untuk diagnosis adalah kunci kepada rawatan yang berjaya, akibatnya kelaziman penyakit berkurangan. Kaedah tradisional mengenal pasti penyakit tidak selalu menghasilkan kesan yang diingini.

    Jadi analisis PCR setakat ini telah menjadi salah satu kaedah diagnostik yang boleh dipercayai dan selamat di peringkat awal penyakit.

    Artikel Tambahan Mengenai Laryngitis