Apakah analisis PCR untuk tuberkulosis

Kaedah inovatif untuk mengesan mikroorganisma, yang dicipta oleh saintis Cary Mullis pada akhir abad lalu - analisis PCR. Dia menerima untuk tulisannya Hadiah Nobel. Sepenuhnya proses ini dipanggil reaksi rantai polimerase. Ia terdiri daripada pemulihan jenis mikroorganisma dalam biomaterial yang disediakan menggunakan serpihan DNA pendek. Ini membolehkan anda mengesan jangkitan pada peringkat awal dan memulakan rawatan serta-merta, tanpa membawa kepada gejala dan komplikasi yang serius.

Apakah analisisnya

Diagnosa oleh PCR adalah untuk mendapatkan segmen DNA patogen dari bahan biologi dan menyelaraskannya dalam rantai yang betul. Ini membolehkan pengenalpastian mikroorganisma yang dimiliki oleh sel-sel.

Prosedur ini dijalankan dalam tiga peringkat:

1. Pengumpulan bahan biologi.
2. Pengenalpastian dan penyelarasan DNA.
3. Pengiktirafan jangkitan.

Kajian ini memerlukan peralatan perubatan khas - amplificatory. Ia dilengkapi dengan kamera, di mana bahan yang dikaji berinteraksi dengan suhu tinggi dan enzim kimia. Di pintu keluar, juruteknik makmal mempunyai rantai DNA panjang agen penyebabnya, jika ada satu di dalam tubuh manusia.

Bagaimana untuk mempersiapkan diagnosis

Analisis PCR adalah proses kejuruteraan genetik kompleks yang memerlukan ketepatan dan kesungguhan dari kedua-dua juruteknik dan pesakit makmal. Peranan yang besar dalam ketepatan keputusan analisis dimainkan oleh penyediaan prosedur, iaitu pengumpulan bahan yang benar.

Sumber utama maklumat tentang penyakit adalah:

Pilihan lain boleh digunakan, cecair, jika perlu, diambil untuk analisis dari organ yang berlainan.

Bagi pesakit, ada peraturan tertentu yang mesti diikuti sebelum prosedur. Jika terdapat ujian darah, dilarang selama 8 jam sebelum koleksi:

• makan makanan;
• untuk merokok;
• minum minuman beralkohol;
• mengambil ubat di dalamnya.

Pada waktu petang, sebelum mengumpul dahak, dadah mabuk untuk mengecilkannya dan memudahkan eksploitasi. Pada waktu pagi, kumpulkan bahan selepas kebersihan menyeluruh rongga mulut.

Urin dikumpulkan dalam balang steril pagi pada perut kosong, selepas mencuci, sebelum mengambil sebarang ubat.

Sekiranya seseorang mengambil antibiotik, maka analisis tindak balas rantai polimer perlu ditangguhkan, jika tidak, hasil PCR tidak boleh dipercayai. Sputum atau darah perlu disumbangkan dua minggu selepas berakhirnya rawatan.

Bagaimana proses mengenal pasti bakteria

Secara ringkasnya, proses itu adalah untuk mengasingkan sebahagian daripada DNA. Penggunaan kaedah moden kejuruteraan genetik membolehkan kita menentukan jenis mikroorganisma. Selain itu, bahan untuk analisis memerlukan sejumlah kecil.

Secara teknikal, ini adalah prosedur yang sangat rumit, tetapi ia memerlukan sedikit masa daripada kajian bakteriologi klasik. Patogen tidak perlu diasingkan dari biomaterial, tidak ada keperluan untuk membesar selama beberapa minggu. Pada hari penghantaran, pesakit sudah dapat mengetahui hasil analisisnya.

Seluruh proses PCR berjalan secara berperingkat:

1. Kerja sedang dijalankan dengan bentuk utama DNA, yang pada suhu tinggi, hampir 100 darjah, dibahagikan kepada dua rantai.
2. Suhu berkurangan, benang disambungkan kepada serpihan asid nukleik - primer.
3. Elongation terjadi - sintesis struktur molekul.

Seluruh sesi terdiri daripada kira-kira tiga puluh prosedur sedemikian, mengulangi kitaran sebagai reaksi berantai. Ini adalah perlu untuk mewujudkan bilangan sel di mana bakteria yang dihasilkan menjadi dikenali.

Kesimpulan kajian ini

Deskripsi hasil PCR (tindak balas rantai polimer) memberikan doktor TB, ia mudah atau digunakan. Dalam kes pertama, perihalan hanya akan mengandungi maklumat mengenai kehadiran atau ketiadaan tongkat Koch. Sekiranya penyahkodan terperinci, daripadanya anda dapat mengetahui tahap penyakit, fokusnya. Mengikut kriteria ini, adalah mungkin untuk menentukan rawatan yang paling sesuai untuk batuk kering dalam setiap kes.

Analisis polimerase tindak balas rantai tidak membezakan antara patogen hidup dan mati, dan hanya bercakap tentang kehadiran mereka. Oleh itu, masuk akal untuk lulus ujian kedua untuk tuberkulosis hanya 3-4 minggu selepas terapi terapi yang ditetapkan oleh doktor.

Jika hasilnya positif, tulisan "Mycobacterium tuberculosis" diletakkan pada kesimpulan. Sekiranya terdapat keputusan negatif, bersebelahan dengan nama baku bakteria terdapat tanda "tidak dikesan." Analisis mungkin positif palsu. Ini jarang berlaku - sekiranya berlaku pelanggaran teknik melakukan kajian PCR atau kehadiran mikroorganisma yang tidak berdaya maju. Kesimpulan terakhir mengenai penyakit ini hanya boleh dibuat oleh doktor TB.

Kelebihan kaedah

Diagnosis PCR tuberkulosis telah mendapat populariti kerana banyak sebab. Ia mempunyai banyak kelebihan, termasuk:

1. Ketepatan penyelidikan. Apabila menganalisis teknologi, adalah mungkin untuk mengenal pasti bakteria, walaupun terdapat dalam jumlah kecil.
2. Hasil Pantas. Seluruh proses dari mengumpul bahan ke kesimpulan selesai mengambil masa kira-kira 5 jam. Apabila dibandingkan dengan penaburan, ia perlu menunggu sehingga beberapa minggu.
3. Keselamatan penuh untuk orang itu, tidak seperti fluorografi dengan sinarannya.
4. Sebarang biomaterial cair digunakan. Untuk pelaksanaan PCR dalam tuberkulosis pulmonari, sputum memberikan maklumat yang paling tepat, dalam meningitis yang berbahaya, sampel diambil dari kord rahim. Ujian darah membantu mengenal pasti penyakit jangkitan tempatan.
5. Kepekaan bakteria terhadap antibiotik diuji. Ini membolehkan anda menetapkan rawatan yang betul.
6. Diagnosis awal. Anda boleh mengetahui tentang kehadiran penyakit sebelum permulaan simptomnya.

Di samping aspek positif, terdapat juga kekurangan. Yang utama adalah harga. Analisis PCR tidak murah, yang dikaitkan dengan penggunaan peralatan mahal. Satu lagi kelemahan adalah keperluan untuk menunggu masa untuk ujian semula selepas rawatan untuk tuberkulosis. Kadang-kadang hasil ujian adalah positif palsu. Ini berlaku kerana mutasi bakteria.

Apabila PCR diperlukan

PCR untuk batuk kering paru tidak mempunyai kontraindikasi dan sememangnya selamat. Oleh itu, terdapat situasi dan penyakit tertentu apabila ini adalah satu-satunya kemungkinan penyelidikan.

Ini termasuk:

• kehamilan;
• bersentuhan dengan pesakit tabung;
• kesukaran dalam menentukan diagnosis penyakit paru-paru;
• pemeriksaan sebelum pembedahan;
• reaksi alahan;
• Jangkitan HIV;
• umur muda.

Anda boleh menggunakan kaedah PCR ke arah yang dikeluarkan dalam phthisiology, serta pakar pediatrik, doktor atau ahli pulmonologi.

Apa yang boleh menggantikan diagnosis PCR tuberkulosis

Jenis tinjauan lain tidak menjadi usang tetapi terus digunakan. Ia digunakan dalam kes di mana ia tidak mungkin untuk melakukan PCR untuk tuberkulosis. Di samping itu, kaedah moden tidak ideal, kadang kala penunjuknya dipersoalkan dan memerlukan pemeriksaan semula.

Kaedah berikut membantu menentukan kehadiran tuberkulosis dalam seseorang:

• diagnosis tuberculin (Mantoux);
• fluorografi;
• pengujian bahan biologi untuk flora;
• x-ray paru-paru.

Kajian ini adalah percuma dan tersedia untuk semua orang. Tetapi mereka mempunyai kelemahan mereka:

• Ujian tuberkulosis menyebabkan alahan. Kontraindikasi dalam penyakit kulit.
• Kajian sinar-X diiringi oleh radiasi, yang tidak berkenaan dengan kanak-kanak, orang yang mengalami kekurangan dan wanita hamil.
• Analisis bakteriologi mengambil lebih banyak masa, hasilnya boleh menunggu sehingga sebulan.

Alternatif bukan jaminan seratus peratus kesimpulan yang betul. Mereka sering digunakan untuk tujuan pencegahan. Diagnosis tuberkulosis oleh PCR memberikan maklumat yang paling boleh dipercayai. Jika boleh, lebih baik menggunakannya.

Kepastian tuberkulosis pada kanak-kanak dan keperluan untuk PCR

Kanak-kanak perlu dilindungi terutamanya dari penyakit ini - jangkitan tuberkulosis boleh menyebabkan kemudaratan serius kepada badan dengan imuniti belum terbentuk sepenuhnya.

Selepas memasukkan tongkat Koch ke dalam organisma kanak-kanak, perkembangan penyakit itu akan melalui peringkat berikut:

• Laten. Ia berlangsung sehingga setahun, tanpa memberikan apa-apa gejala.
• Ketoksikan. Mempengaruhi kesihatan keseluruhan. Kelihatan lemah, tidak peduli, kurang selera makan, mengantuk dan menurun prestasi. Selalunya suhu yang agak tinggi.
• Bentuk utama penyakit ini. Tuberkulosis adalah setempat, membentuk tumpuan penyakit. Kanak-kanak mempunyai batuk, sesak nafas, sakit kepala, nodus limfa yang bengkak.
• Bronchoadenitis Tubercular. Gejala adalah kesakitan pada bilah bahu, batuk dengan pelbagai bunyi, mengi.

Biasanya, tuberkulin disuntik untuk mengenal pasti jangkitan di bawah kulit kanak-kanak. Sekiranya pemeriksaan jenis ini dikontraindikasikan, maka PCR untuk tuberkulosis adalah pilihan yang tidak diperlukan untuk diagnosis. Kanak-kanak biasanya mengambil ujian darah, tetapi jika ia diperlukan, sputum dikumpulkan. Sekiranya terdapat kecurigaan kehadiran tuberkulosis, kajian tambahan dijalankan untuk memastikan keputusan positif dan segera memulakan rawatan pada peringkat awal, mencegah perkembangan penyakit ini.

Kaedah penyelidikan moden sentiasa lebih cepat dan lebih dipercayai. Sayang sekali kerana alatan mahal untuk membuat ujian sedemikian ada kemungkinan tidak di semua institusi perubatan dan tempatan. Bagaimana cara untuk menjalankan peperiksaan biasanya dipilih oleh doktor, tetapi pesakit mempunyai hak untuk memilih. Jika anda perlu mengambil ujian PCR, beritahu kami tentangnya dalam ulasan. Jika artikel itu berguna untuk anda, kongsi di rangkaian sosial - mungkin ia akan membantu rakan anda.

Apakah PCR untuk tuberkulosis dan bagaimana membuat ujian?

PCR untuk tuberkulosis ditetapkan apabila tidak mungkin membuat diagnosis atau tidak mungkin melakukan kajian lain. Analisis ini memungkinkan untuk mengenal pasti tongkat Koch di peringkat terawal dan memulakan rawatan tepat pada masanya.

Perihalan PCR untuk batuk kering

Petunjuk untuk diagnostik PCR

Jenis PCR untuk batuk kering

Penyediaan untuk analisis

Bagaimana PCR untuk tuberkulosis?

Tafsiran hasil tinjauan

Kepastian PCR untuk batuk kering pada kanak-kanak

Berapakah jumlah PCR untuk kos tuberkulosis?

Komen dan Ulasan

Perihalan PCR untuk batuk kering

PCR (tindak balas rantai polimer) untuk tuberkulosis adalah analisis yang tepat yang dapat mengesan tongkat Koch dalam beberapa jam. Diagnostik adalah berdasarkan kaedah kejuruteraan genetik. Doktor mengasingkan sel DNA, menggunakan ujian molekul gen untuk menentukan jenis patogen.

Kelebihan kaedah

• membolehkan anda mengenal pasti patogen pada peringkat awal, tanpa manifestasi gejala yang kelihatan;
• Diagnostik tidak ada contraindications dan dibenarkan untuk kanak-kanak;
• penyelidikan boleh dijalankan dengan mengambil jumlah minimum bahan.
• universiti penyelidikan biomaterial;
• Kajian ini berkesan dalam menentukan penyakit yang berulang.

Kelemahan kaedah ini

Bersama dengan kelebihan, kajian PCR juga mempunyai kelemahan.

Yang utama ialah:

1. Kajian ini bukan di mana-mana sahaja yang anda boleh lulus. Oleh kerana peralatan untuk diagnosis seperti itu mahal, ia dipasang di makmal yang dibayar.
2. PCR untuk tuberkulosis boleh memberi tindak balas positif jika ia mengesan mikobakteria yang telah mati, sebagai contoh, selepas rawatan.
3. Mutasi patogen ketara mengurangkan keberkesanan kaedah PCR, kerana lembaran DNA tidak mampu menghasilkan sintesis secara berurutan.
4. Keperluan untuk memilih biomaterial dengan teliti untuk dianalisis.

Petunjuk untuk diagnostik PCR

Hantar kepada kaji selidik untuk tanda-tanda berikut:

1. Sekiranya terdapat sekurang-kurangnya satu hubungan dengan pesakit dengan tuberkulosis dan sukar untuk mengenal pasti penyakit menggunakan ujian standard.
2. Terdapat situasi apabila tidak mungkin untuk membawa seseorang untuk X-ray atau kajian lain. Dalam kes sedemikian, lebih mudah menyampaikan sputum.
3. Analisis ini dilantik pada malam sebelum operasi yang akan datang, apabila perlu menentukan sama ada seseorang sakit atau tidak.
4. Jika pesakit mempunyai hasil yang meragukan tindak balas Mantoux.
5. Berikan kepada wanita hamil dan kanak-kanak untuk mengelakkan pendedahan kepada x-ray.

Jenis PCR untuk batuk kering

Pilihan biomaterial untuk pemeriksaan untuk tuberkulosis perlu dilantik secara individu.

Untuk diagnosis PCR untuk tuberkulosis boleh mengambil ujian:

Ujian darah

Ciri-ciri ujian darah untuk batuk kering:

1. Dilakukan dalam kes di mana diagnostik lain tidak sesuai atau kontraindikasi. Sebagai contoh, untuk membuat diagnosis yang betul, anda perlu mengambil lebih daripada satu imej X-ray. Pendedahan yang berlebihan tidak selamat untuk badan, jadi lebih mudah untuk mengambil darah dari pesakit.
2. Juga, doktor boleh memberikan arahan kepada darah apabila menerima hasil kontroversi selepas fluorografi.

Analisis air liur

1. Analisis air liur kurang popular dan bermaklumat daripada kajian lain, kerana batuk kering tidak menjejaskan kelenjar air liur. Oleh itu, dalam kebanyakan kes, hasilnya akan negatif.
2. Kaedah ini bertujuan untuk mengenalpasti bentuk paru-paru dan ekstrapulmonari.
3. Jika warna sampel tidak berubah di bawah tindakan reagen, ini bermakna tiada patogen. Jika, bagaimanapun, kecurigaan penyakit timbul, maka analisis analisis tambahan dilakukan.

Analisis sputum

Analisis sputum adalah yang paling bermaklumat untuk mengesan patogen tuberkulosis. Sampel diambil beberapa kali, sebagai peraturan, tiga kali cukup. Ini menghapuskan kemungkinan kesilapan dalam mendapatkan bahan berkualiti rendah.

Sekiranya seseorang dijangkiti tuberkulosis, selesema dalam jumlah kecil akan dikeluarkan bersama-sama dengan batuk. Pada pesakit dalam peringkat lanjut penyakit itu, lendir akan dikeluarkan dengan tompok berdarah.

Ia tidak digalakkan mengambil sputum untuk pemeriksaan jika pesakit mempunyai kecurigaan tuberkulosis tulang atau sistem saraf.

Analisis air kencing

Urinalisis adalah salah satu cara untuk mengesan bentuk ekstrapulmonary penyakit: sistem tuberkulosis ginjal dan sistem kencing.

Dalam kes bentuk pulmonari penyakit ini, analisis umum air kencing adalah tidak praktikal, kerana tidak ada perubahan patologi yang jelas.

Dari video anda akan mengetahui doktor yang membuat diagnosis tuberkulosis. Dilancarkan oleh saluran tuberculum. ru.

Penyediaan untuk analisis

Apabila mengambil PCR ujian darah harus mengikuti beberapa peraturan untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai:

• Adalah disyorkan untuk mengambil analisis perut kosong;
• harus mengecualikan alkohol pada malam sebelum tinjauan;
• anda perlu mengambil antibiotik 15-20 hari sebelum analisis;
• Adalah disyorkan untuk menahan diri dari merokok selama satu jam sebelum pengumpulan darah.

Apabila mengambil sputum untuk pemeriksaan, ia juga disyorkan untuk mengikuti beberapa peraturan:

• bahan dikumpulkan pada waktu pagi, oleh itu, mereka pra-berus gigi mereka dan teliti bilas rongga mulut;
• jika dahaga tidak bergerak dengan baik, disyorkan untuk mengambil expectorant di waktu petang atau menghirup;
• Ia perlu berhenti mengambil antibiotik 15 hari sebelum peperiksaan.

Untuk mendapatkan hasil analisis air kencing yang boleh dipercayai, pesakit disarankan untuk mematuhi peraturan berikut:

• bahan mesti dikumpulkan pada waktu pagi;
• pada malam itu tidak disyorkan untuk memakan makanan yang boleh mengubah warna cecair (bit, blueberry dan lain-lain);
• Berhenti mengambil antibiotik selama 15 hari sebelum peperiksaan.

Bagaimana PCR untuk tuberkulosis?

Ciri pengambilan bahan:

1. Ujian darah diambil dari pesakit pada waktu pagi dari vena di makmal.
2. Untuk penghantaran sputum pada lendir, semestinya perlu dari laring, dan sebaik-baiknya tanpa banyak air liur. Pesakitnya harus meludah ke dalam bekas steril khas, kemudian diserahkan kepada kajian.
3. Doktor mengambil mengikis dengan alat khas dari mukosa pipi.
4. Urin disewa dalam bekas khas. Ambil bahagian tengah bahagian pagi.

Tindak balas genetik molekul oleh PCR dilakukan menggunakan alat khas yang dipanggil penguat. Untuk mengkaji segmen DNA yang diperlukan, yang memulakan sintesis molekul.

Teknik ini terdiri daripada empat tahap:

1. Pada mulanya, biomaterial yang diperlukan dikumpulkan untuk penyelidikan (darah, dada dan air liur).
2. Kemudian sampel dipanaskan pada suhu sehingga 98 darjah dan tidak lebih daripada dua minit. Oleh itu, bentuk utama genetik DNA telah musnah dan dua rantai terbentuk.
3. Seterusnya datang penyepuhlindapan atau pengurangan suhu, kerana yang primer mengikat ke helai DNA.
4. Peringkat terakhir dipanggil elongation. Ini adalah sintesis molekul, yang membawa kepada hasil akhir.

Anda perlu menghabiskan 25-30 kitaran sedemikian untuk mendapatkan sejumlah salinan DNA virus. Agen penyebab penyakit itu ditentukan oleh mereka.

Kandungan maklumat dan kebolehpercayaan diagnostik PCR adalah 100%.

Tafsiran hasil tinjauan

Masa pengeluaran analisis adalah kira-kira 5-6 jam.

Diagnostik dengan kaedah PCR memberikan 2 varian keputusan:

1. Dikesan. Dalam bahan yang disiasat, DNA ejen tuberkulanya dikesan. Kebarangkalian jangkitan adalah 97%. Pesakit sedemikian cepat dihantar ke ubat TB, di mana rawatan akan dijalankan.
2. Tidak dikesan. Satu tindak balas negatif menunjukkan ketiadaan agen penyebabnya.

Sekiranya hasilnya positif, doktor melakukan penyahkod terperinci, yang menentukan peringkat dan fokus penyakit.

Galeri Foto

Kepastian PCR untuk batuk kering pada kanak-kanak

PCR ditetapkan jika keputusan ujian Mantoux tidak pasti atau pada kecurigaan sedikit jangkitan. Menyediakan prosedur selamat untuk kanak-kanak.

Diagnosis PCR tuberkulosis pada kanak-kanak dan orang dewasa: tanda-tanda untuk

Pertubuhan Kesihatan Sedunia diiktiraf 20 tahun yang lalu bahawa kadar penyebaran tuberkulosis tidak terkawal dan mencapai skala wabak. Sejak itu, keadaan tidak bertambah baik. Lebih daripada satu juta kes penyakit itu didiagnosis setiap tahun, di mana hampir satu perempat adalah maut. Dalam dekad yang lalu, kadar kejadian di kalangan kanak-kanak telah meningkat, kebanyakan bentuk penyakit tidak meminjamkan diri kepada terapi antibiotik yang standard.

Hari ini, salah satu tugas global untuk ubat adalah pembangunan kaedah diagnostik sedemikian yang akan membolehkan untuk mengenal pasti patologi sebelum permulaan gejala klinikal yang dinyatakan. Salah satunya adalah tindak balas rantai polimerase (PCR) untuk tuberkulosis, yang membantu mengesan penyakit Koch yang menyebabkan darah, dentuman dan cecair biologi yang lain.

Diagnosis tuberkulosis

Ujian pemeriksaan bertujuan untuk mengesan pesakit, pembawa tuberkulosis dan mencegah penyebaran jangkitan dalam masyarakat. Bagi kanak-kanak di bawah umur 14 tahun, ujian Mantoux digunakan secara besar-besaran. Ini adalah ujian imunologi di mana dos tuberculin disuntik subcutaneously - gabungan kompleks bahan genetik beberapa jenis mycobacteria. Penampilan reaksi yang jelas menunjukkan proses menular yang aktif.

Untuk pemeriksaan pencegahan pada orang dewasa menggunakan fluorografi atau x-ray. Kaedah ini membantu menggambarkan lesi patologi dalam tisu paru-paru. Walau bagaimanapun, ia menyebabkan kesukaran untuk membezakan tuberkulosis daripada patologi organik lain (neoplasma malignan dan jinak, proses keradangan, pencerobohan parasit, kerosakan paru-paru profesional).

Untuk menjelaskan struktur dan saiz fokus patologi, kajian instrumental tambahan mungkin diperlukan:

• radiografi yang disasarkan;
• pengiraan tomografi;
• pengimejan resonans magnetik.

Kaedah untuk diagnosis batuk kering

Dalam kes keputusan yang diragukan dan untuk pelantikan terapi yang mencukupi, terdapat keperluan untuk kaedah diagnostik yang lebih tepat yang membolehkan anda mengasingkan patogen. Pemeriksaan Mikroskopik dan bakteriologi bagi sputum digunakan untuk mengesahkan bentuk tuberkulosis paru-paru untuk masa yang lama.

Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, kejadian mycobacterium dari pelbagai organ dan sistem - buah pinggang, tulang, usus, kulit - telah menjadi lebih kerap. Untuk mengenal pasti bentuk tuberkulosis, pemeriksaan ultrasound, kencing dan feses, pemeriksaan endoskopik boleh digunakan.

Diagnosis PCR untuk tuberkulosis akan membantu mengesahkan kehadiran koch sticks dalam darah, serta kepekaannya terhadap ubat-ubatan tertentu. Ini adalah kaedah yang sangat berkesan berdasarkan pengesanan bahan genetik bakteria dalam pelbagai cecair biologi.

Spesifikasi dan petunjuk

Tindak balas rantai polimerase adalah kaedah diagnostik mikrobiologi yang sangat sensitif, yang berdasarkan prinsip-prinsip kejuruteraan genetik. Untuk mengesahkan kehadiran patogen dalam bahan biologi, cukup untuk mengesan serpihan asid nukleik yang unik untuknya. PCR untuk tuberkulosis dapat mengesan bakteria dalam darah, sputum, air kencing.

Pada masa ini, dibangunkan beberapa kaedah analisis. Yang paling popular di antara mereka adalah yang berikut:

• PCR masa nyata;
• teknologi mikrofluid;
• penjujukan dan pyrosequencing.

PCR masa nyata

Makmal paling kerap menggunakan tindak balas rantai polimer masa nyata, kerana ia mengurangkan bilangan hasil positif palsu, dan proses analisis itu sendiri mengambil masa yang singkat.

Memandangkan sebilangan besar bentuk tersembunyi penyakit dan ketidakcekapan kaedah diagnostik standard, PCR semakin digunakan. Tujuan analisis ini ditunjukkan di:

• mengenal pasti kawasan mencurigakan pada sinar-X;
• keputusan ujian uberculin yang ragu;
• kemustahilan melakukan analisis mikroskopik dan bakteriologi dari dahak pada orang dalam keadaan yang serius;
• melakukan campur tangan pembedahan apabila perlu memastikan dengan cepat bahawa tidak ada jangkitan;
• tidak dapat diterima penggunaan fluorografi, x-ray atau tomografi yang dikira (contohnya, dalam wanita mengandung dan menyusu, dalam kes pendedahan radiasi yang berlebihan);
• disyaki batuk kering ekstrapulmonary (disyorkan bukan sahaja darah tetapi juga dahak digunakan).

Diagnosis PCR tuberkulosis telah membuktikan dirinya dalam pemeriksaan kanak-kanak, kerana kurangnya pendedahan tambahan dan keputusan pesat.

Prosedur persediaan dan analisis

Persediaan khusus untuk darah PCR tidak diperlukan. Walau bagaimanapun, untuk mengelakkan komplikasi pensampelan darah dan untuk mendapatkan bahan yang berkualiti tinggi, peraturan am berikut harus diikuti:

• analisis perlu diambil pada waktu pagi tidak lebih awal daripada 2 jam selepas bangun;
• Ia harus menghadkan pengambilan makanan berlemak dan goreng sehari sebelum sampel darah;
• menahan diri dari makan, teh dan kopi selama 8-9 jam, dibenarkan minum air bersih;
• Jangan merokok selama sekurang-kurangnya 3-4 jam.

Dalam kes ubat kekal (hormon, antikoagulan, ubat anti-radang, antibiotik, penipisan darah), anda perlu memaklumkan pembantu makmal mengenai perkara ini.

Sekiranya penghantaran sputum, anda perlu berus gigi dengan baik dan bilas mulut anda beberapa kali. Kumpulkan bahan dalam bekas steril. Untuk keputusan yang lebih baik, agen expectorant atau mucolytic boleh diambil pada waktu petang.

Diagnosis itu sendiri terdiri daripada beberapa peringkat.

Bahan pagar. Ia boleh dilakukan di makmal dan dari jauh. Sesetengah jenis bahan yang dikumpul pesakit secara berasingan (air kencing, kahak).

Pemusnahan struktur asid nukleik (denaturasi molekul DNA dan RNA). Untuk melakukan ini, bahan ujian dipanaskan pada suhu 98 darjah dan dipegang selama beberapa minit. Akibatnya, heliks berganda melepaskan, molekul terkandas tunggal terbentuk.

Annealing Selepas menambah primer (seksyen pendek asid nukleik), suhu berkurangan dengan beberapa darjah, polimerase diaktifkan.

Elognation. Suhu dibawa ke tahap yang optimum, aktiviti enzim mencapai maksimum dan rantai kedua diselesaikan selaras dengan peraturan Chargaff yang saling melengkapi.

Untuk menyelesaikan kajian, diperlukan untuk mensintesis bilangan molekul DNA yang diperlukan - kira-kira 50 kitaran reaksi di atas. Ia mengambil masa kira-kira 2-3 jam. Hasil positif tindak balas tidak selalu menunjukkan tahap aktif penyakit, tetapi merupakan penunjuk kehadiran mikroorganisma dalam tubuh.

Kelebihan dan keburukan kaedah ini

Sebagai perbandingan dengan kaedah mikrobiologi lain, PCR tidak mengambil masa yang lama untuk mengesan Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR, hasilnya dapat diperoleh pada hari ujian.

Satu lagi kelebihan adalah kekhususan tinggi analisis, yang memungkinkan untuk mengesan kehadiran patogen dengan ketepatan 90-95% dalam hampir mana-mana biomaterial (darah, air kencing, najis, cecair serebrospinal, sputum, bronchus flushing).

Walau bagaimanapun, terdapat beberapa kelemahan kaedah:

• peratusan yang agak tinggi hasil positif palsu (sehingga 15%), yang dikaitkan dengan pengesanan mikroorganisma yang tidak hidup;
• dalam sesetengah kes, anda boleh melangkau fakta penyakit, kerana Mycobacterium tuberculosis sering tertakluk kepada mutasi dan perubahan genetiknya;
• kecekapan rendah dalam pemeriksaan orang yang mempunyai kekurangan immunodeficiency;
• kos penyelidikan yang tinggi, keperluan peralatan dan reagen yang mahal.

Apa yang boleh diganti?

Memandangkan pelbagai bentuk jangkitan tuberkulosis, untuk diagnosis yang lebih tepat dan pilihan rawatan adalah perlu untuk menggabungkan beberapa kajian diagnostik:

Analisis mandatori untuk kanak-kanak adalah ujian Mantoux. Sekiranya pengenalan tuberculin (bahan genetik mycobacteria) berlaku reaksi yang jelas, ia boleh dijangkiti jangkitan dengan bacillus tubercle.

Kaedah sinar-X boleh digunakan untuk menggambarkan fokus patologi. Dalam diagnosis tuberkulosis extrapulmonary, kaedah endoskopik digunakan dengan biopsi serentak:

• bronkoskopi membantu mengenal pasti lesi-larynx, trakea, bronkus;
• kolonoskopi - usus;
• cystourethroscopy - organ sistem kencing;
• histeroskopi - alat kelamin wanita. Kaedah ini tidak khusus, untuk membuat diagnosis yang tepat, patogen perlu dikenalpasti.

Ujian klinikal umum akan membantu untuk menentukan keadaan badan yang lebih khusus. Kiraan darah lengkap dengan formula leukosit diperlukan.

Peningkatan bilangan neutrophil dengan tahap limfosit yang dikurangkan dan peningkatan kadar sedimentasi erythrocyte (ESR) menunjukkan proses keradangan bakteria etiologi yang aktif. Mengecualikan kerosakan pada organ sistem kencing menggunakan urinalis umum dan budaya untuk kemandulan.

PCR kini boleh didapati di kebanyakan makmal swasta. Ini memerlukan bukan sahaja pakar yang berkelayakan, tetapi juga peralatan mahal, sebilangan besar reagen. Oleh itu, penggunaan kaedah ini adalah terhad walaupun mempunyai ketepatan dan kekhususan yang tinggi.

Reaksi rantai polimerase (PCR) untuk tuberkulosis

Tuberkulosis adalah salah satu penyakit yang paling berbahaya yang mana manusia telah menderita selama beratus-ratus tahun. Walaupun para saintis dapat mengenal pasti agen penyebab dan mencipta antibiotik untuk menghapuskannya, rawatan itu tidak selalu berjaya. Alasan utama ialah tempoh laten atau laten penyakit yang panjang, yang boleh bertahan beberapa tahun. Diagnosis lewat jauh mengurangkan peluang pesakit untuk pemulihan dan kehidupan yang penuh.

Apakah PCR?

Untuk mengesan mycobacterium tuberculosis dalam badan selama lebih dari seratus tahun, ujian Mantoux telah berjaya digunakan. Kaedah lain telah membuktikan diri mereka dengan baik: budaya bacteriological dalam medium tiruan, mikroskopi smear, ELISA. Walau bagaimanapun, sejumlah besar komplikasi dan hasil positif palsu, serta tempoh beberapa kaedah, memerlukan pengenalan teknologi baru ke dalam metodologi diagnostik. Penemuan besar dalam bidang mikrobiologi ialah kemunculan analisis PCR untuk tuberkulosis. Selama beberapa dekad, ia telah menunjukkan keberkesanannya dan digunakan secara meluas untuk diagnosis pembezaan pelbagai bentuk tuberkulosis.

Analisis PCR untuk tindak balas rantai tuberkulosis atau polimerase adalah satu kaedah untuk mengesan DNA bakteria atau serpihan mereka, yang berdasarkan peningkatan molekul asid nukleik di bawah tindakan polimerase DNA enzim. Untuk keputusan yang positif, hanya satu molekul DNA patogen yang mencukupi, jadi kaedah ini dianggap sangat sensitif. Diagnosis OCP dalam tuberkulosis adalah lebih berkesan daripada pembiakan mycobacteria dalam persekitaran buatan, kerana, tidak seperti kaedah budaya, ia memungkinkan untuk membezakan antara strain liar dan vaksin yang divaksinasi dengan BCG. Ini mengelakkan positif palsu dan membuat diagnosis lebih tepat.

Faedah PCR

Diagnosis PCR untuk tuberkulosis memungkinkan untuk mengesan bakteria Koch dalam persekitaran biologi organisma dengan penentuan komposisi kuantitatif mereka walaupun pada peringkat awal penyakit, apabila mikobakteria tidak aktif. Diagnosis penyakit dalam fasa laten memungkinkan untuk memulakan rawatan prophylactic dalam masa, untuk mencegah perkembangan keradangan dalam paru-paru dan kemunculan komplikasi dalam organ dan sistem lain. Di samping itu, ujian PCR untuk tuberkulosis mempunyai beberapa kelebihan:

• kekhususan tinggi - 90-100%;
• kelajuan tinggi - dari 4 jam hingga 2 hari;
• sensitiviti yang tinggi, terutamanya dalam kekurangan immunodeficiency;
• diagnosis pembezaan.

Kelebihan utama kaedah ini ialah diagnosis CRC tuberculosis pada kanak-kanak memungkinkan untuk membezakan bentuk penyakit tersebar dari fokus terhad, walaupun dengan hasil negatif daripada ujian lain. Ujian Berbeza membolehkan anda memilih rejimen rawatan yang tepat dan meningkatkan keberkesanan terapi.

Khas ketekalan analisis dicapai dengan menghapuskan reaksi silang dengan molekul asid nukleus lain, dan kepekaan tinggi memungkinkan untuk mengesan mikobakteria walaupun dalam jumlah kecil bahan yang dikumpulkan. Kaedah pneumonia untuk tuberkulosis mempunyai kebolehpercayaan yang paling besar, spesifikasinya mencapai 100% berbanding dengan kajian bahan biologi lain.

Mekanisme khas PCR menyediakan peluang yang mencukupi untuk mengesan tongkat Koch dalam pesakit imunocompromi. Mengikut kaedah analisis, reaksi mengesan antigen, jadi tidak mengapa jika badan menghasilkan antibodi kepada patogen, atau tidak. Oleh itu, adalah mungkin untuk mendiagnosis bentuk ekstrapulmonary penyakit dan kes-kes lanjutan dalam pesakit yang mengalami kesilapan dalam sistem imun, yang tidak mungkin menggunakan kaedah lain.

Kelemahan kaedah ini

Walaupun banyak kelebihan dan sensitiviti tinggi ujian, PCR untuk tuberkulosis boleh memberikan hasil negatif palsu. Oleh kerana jumlah biomaterial yang sangat kecil diambil untuk diagnosis, hakikat bahawa patogen "menyembunyikan" dalam sel atau tumpahan keradangan tidak dikecualikan dan tidak dilepaskan di luar.

Kepekaan kaedah ini pada kanak-kanak adalah 25-80%. Sebagai contoh, dalam kajian rawak dalam sekumpulan pesakit dengan diagnosis klinikal yang terbukti, ujian darah PCR untuk tuberkulosis memberi hasil positif hanya pada 50% pesakit. Dalam hal ini, apabila menguji kanak-kanak untuk mikobakteria patogen, tidak mungkin menggantikan satu kaedah diagnostik dengan yang lain. Untuk memastikan sepenuhnya ketiadaan jangkitan, perlu melakukan kajian komprehensif dalam beberapa cara sekaligus.

Proses pengumpulan

Keadaan utama untuk kebolehpercayaan diagnostik PCR adalah mematuhi peraturan untuk mengumpul cecair biologi untuk analisis. Bahan yang terkumpul atau tidak betul boleh menyebabkan keputusan tidak betul. Yang paling biasa adalah analisis sputum, darah dan air kencing, tetapi untuk diagnosis pembezaan yang lebih mendalam, anda boleh mengambil sampel dari kandungan perut, cecair sinovial, cecair cerebrospinal, cecair bronchi flushing, sperma, rembesan prostat.

Urin PCR untuk tuberkulosis diambil pada waktu pagi selepas kebersihan kelamin luar oleh kencing ke dalam bekas steril. Semasa prosedur, adalah penting untuk tidak menyentuh dinding dalaman bekas untuk mengelakkan masuknya mikroorganisma pihak ketiga. Wanita yang menjalani kehidupan seks biasa pastinya akan meletakkan tampon di dalam vagina untuk mengelakkan pelepasan pihak ketiga.

Ujian darah diambil pada waktu pagi pada perut kosong, dan PCR dari dahak untuk tuberkulosis boleh dilakukan pada bila-bila masa hari dengan kebersihan mulut sebelum mandarin. Ini adalah perlu untuk mengeluarkan residu makanan yang boleh memasuki bekas. Apabila dahagakan expectorating, adalah penting untuk mengelakkan air liur dan lendir dari nasopharynx ke dalam bekas, ini boleh memesongkan data analisis.

Kajian kandungan perut itu dilakukan di hospital pada waktu pagi, sementara selesema yang ditelan semalaman berada di dalam perut. Untuk mengesan mycobacterium tuberculosis, kaedah ini menghasilkan tiga kali ganda pembenihan, yang kemungkinan besar dapat mengasingkan tongkat Koch.

Keputusan penyahkodan

Analisis kualitatif PCR memberikan 2 jenis hasil "dikesan" atau "tidak dikesan." Mereka menandakan satu keputusan positif dan negatif. Jawapannya "dikesan" bermakna DNA agen berjangkit ada dalam sampel ujian, dan dengan kebarangkalian 97% tubuh dijangkiti tuberkulosis. Hasil negatif menunjukkan ketiadaan Koch melekat DNA dalam sampel bahan biologi, dan memberikan peluang 97% bahawa tubuh tidak mempunyai sejumlah besar mikobakteria, dan 60% bahawa orang itu tidak dijangkiti.

Kekhususan terbesar untuk diagnosis tuberkulosis mempunyai ujian darah dan sputum. Dengan hasil yang positif, mereka menunjukkan jangkitan pada tubuh, yang memerlukan langkah-langkah terapi yang mendesak. Kajian biomaterial lain mungkin tidak menunjukkan perjalanan penyakit, tetapi hanya kehadiran bakteria asing. Ini berlaku apabila seseorang adalah pembawa penyakit ini, tetapi tidak menyebarkan jangkitan ke alam sekitar dan tidak menjangkiti orang yang sihat.

Analisis PCR kuantitatif dilakukan kurang kerap, dan doktor yang berurusan dengan penyahkodan keputusannya. Petunjuk penyelidikan digunakan untuk menentukan aktiviti penyakit dan tahap kerosakan kepada badan. Berdasarkan data yang diperoleh, pakar dapat menentukan keberkesanan rawatan, dan jika perlu, menyesuaikan skema terapeutik.

Tuberkulosis sentiasa dan kekal sebagai salah satu masalah yang paling serius untuk kesihatan semua manusia. Kaedah diagnostik moden boleh mengesan penyakit pada peringkat awal untuk memulakan rawatan mengikut masa. Ujian Tuberculin, mikroskopi smear, budaya bakteria pada media nutrien buatan telah membuktikan diri mereka dalam bidang diagnosis makmal tuberkulosis. Walau bagaimanapun, menunggu lama hasil dan peningkatan frekuensi pembacaan positif palsu membuat mereka usang dan dibawa ke hadapan lebih maju teknologi. Analisis PCR adalah kaedah yang sangat khusus dan sangat berkesan untuk mendiagnosis tuberkulosis. Hasilnya adalah yang paling boleh dipercayai di antara semua kaedah makmal yang dicadangkan untuk mengesan tongkat Koch. Ia bukan sahaja membolehkan membuat keputusan akhir, tetapi juga untuk menjalankan diagnosis pembezaan yang diperlukan.

Tindak balas rantaian polimerase untuk batuk kering

Analisis PCR untuk tuberkulosis membolehkan anda mengenal pasti penyakit ini di mana-mana peringkat pembangunan dengan bilangan minimum mikobakteria atau bahkan jika ada serpihan dalam tubuh manusia oleh DNA patogen.

Apakah PCR?

PCR muncul baru-baru ini. Pada tahun 1983, kaedah ini dicipta oleh ahli mikrobiologi Amerika Carey Mullis, yang mana beliau menerima Hadiah Nobel. Asas PCR adalah dua kali ganda dari rantau DNA tertentu dengan bantuan enzim in vitro. Akibatnya, DNA patogen adalah bergaya untuk memvisualisasikan walaupun dalam kehadirannya dalam kuantiti minimum (jejak kehadiran). Inilah standard kelayakan emas.

Tuberkulosis PCR (proses rantai polimer) adalah prosedur diagnostik untuk mengesan jangkitan menggunakan kejuruteraan genetik. Kaedah penyelidikan ini digunakan dalam makmal perubatan mikrobiologi, virologi dan imunologi yang diragui dan praktikal tidak menjanjikan dari segi diagnosis kes.

Apa yang diperlukan untuk analisis?

Analisis memerlukan 3 komponen:

• Sampel DNA.
• Sebatian nukleotida.
• Enzim polimerase.

Analisis ini dikemukakan kepada makmal seperti yang ditetapkan oleh doktor yang merawat.

Apakah asas kaedah itu?

Pada permulaan kajian, segmen DNA mikroba diekstrak daripada biofluid.

PCR menentukan jenis patogen, 2-3 jam selepas ujian. Walau bagaimanapun, ia tidak perlu diasingkan dari bahan biologi atau tumbuh untuk tempoh yang lama di makmal. Perkara utama ialah sampel mengandungi sekeping DNA yang dijangkiti. Semasa analisis tuberkulosis in vitro sintesis buatan jangkitan asid ribonukleik dicipta. Kerana reaksi pesat selepas beberapa jam, anda boleh mendapatkan hasil yang boleh dipercayai.

Tahap diagnosis

Tuberkulosis PCR adalah kaedah diagnostik mudah yang membolehkan anda mendapat jawapan dalam masa yang singkat. Untuk menentukan tbc, bahan biologi seseorang yang dijangkiti (darah, sputum, cecair biologi) diambil.

Diagnosis berlaku dalam tiga peringkat utama:

• Selepas pensampelan di makmal, bentuk utama DNA dimusnahkan. Pada suhu 980 darjah, rantai 1,5 dipisahkan dalam 1.5 minit.
• Pada peringkat seterusnya, penyepuhian dilakukan, suhu udara dikurangkan oleh beberapa bahagian, DNA dihubungkan dengan primer.
• Tahap terakhir kajian disebut elongation. Ia adalah biosintesis molekul.

Untuk mengenal pasti DNA yang dikehendaki dengan zarah jangkitan, diagnostik boleh dilakukan 20-25 kali.

Adakah perlu melakukan PCR untuk tuberkulosis?

Analisis PCR untuk tuberkulosis sentiasa dilakukan apabila terdapat keperluan untuknya, ia termasuk dalam standard kualiti memeriksa pesakit untuk tuberkulosis. Untuk menjalankannya, anda hanya memerlukan rujukan dari doktor anda. Selalunya, dalam poliklinik, kaedah diagnostik lain digunakan untuk menentukan tuberkulosis.

Ini termasuk:

• Meminta dan mengumpul anamnesis.
• Pemeriksaan perubatan.
• Ujian tuberkulin Mantoux.
• X-ray atau fluorografi.
• Ultrasound.
• Diagnosis mikroskopik spesimen dahak.

Walaupun banyak alat diagnostik, jumlah yang dijangkiti setiap tahun semakin meningkat. Di samping itu, patologi itu telah memperoleh beberapa ciri: keterukan proses, peningkatan hasil maut, dan kekebalan patogen kepada dadah.

Doktor tidak mengesyorkan meninggalkan pemeriksaan dan suntikan tahunan, kerana ini meningkatkan risiko menjadi dijangkiti. Analisis PCR mempunyai banyak kelebihan, oleh itu ia dianggap paling tepat dan bermaklumat semua kaedah instrumental untuk mengesan tbc dan digunakan secara meluas dalam klinik moden.

Apakah nilai kaedah?

Proses rantai polimer sering digunakan bersempena dengan kaedah tambahan untuk mengesan jangkitan tuberkulosis. Nilai kaedah adalah seperti berikut:

• Masa pegangan pendek. Sudah selepas 2-3 jam selepas derma darah, adalah mungkin untuk mengesan kehadiran jangkitan dalam bahan biologi. Ini amat diperlukan dalam kes-kes di mana terdapat persoalan hidup dan kematian, dan anda perlu mengenal pasti diagnosis tepat untuk campur tangan pembedahan.
• Beberapa kaedah diagnostik mempunyai kontraindikasi sendiri dan tidak selalu memaparkan gambaran lengkap tentang diagnosis. Dengan bantuan PCR, patogen itu dikesan serta-merta, dan prosedur boleh dilakukan untuk orang-orang dari semua peringkat umur.
• Sebagai sampel, anda boleh mengambil sebarang bahan biologi yang dijangkiti. Untuk menentukan bentuk pulmonari penyakit, air kencing atau air liur diambil. Contoh darah membantu mengenal pasti semua bentuk patologi. Cecair tulang belakang diperlukan untuk menentukan meningitis paru-paru.
• Kaedah keselamatan. Untuk penyelidikan hanya memerlukan bahan biologi pesakit. Oleh itu, ia adalah prosedur yang benar-benar selamat dan tidak berbahaya bagi kedua-dua kanak-kanak dan orang dewasa, tidak seperti fluorografi, yang dilakukan dari usia 18 tahun, dan Mantoux, yang menyebabkan reaksi negatif dalam badan.
• Ujian yang sangat sensitif. Ia memungkinkan untuk mengenal pasti patologi walaupun pada peringkat awal perkembangan, ketika virus belum menyerang semua sel tubuh.
• Kaedah yang berkesan untuk diagnosis patologi berulang.
• Cara yang inovatif untuk mengenal pasti tongkat Koch dari hari-hari pertama perkembangannya. Ini membolehkan anda dengan cepat memulakan rawatan yang betul dan menyelamatkan seseorang dari kematian. Pada peringkat awal perkembangan, patologi boleh sembuh sepenuhnya tanpa komplikasi.

Kaedah diagnosis ini mempunyai banyak kelebihan dan aktif digunakan di pelbagai institusi perubatan. Walau bagaimanapun, walaupun kelebihannya, PCR juga mempunyai ciri-ciri negatifnya.

Apakah kelemahan?

Kelemahan proses rantaian polimer termasuk:

• Kos prosedur yang tinggi.
• Kaedah ini tidak sesuai untuk mereka yang telah menjalani rawatan tbc, kerana sel-sel yang menular mati dapat memberikan hasil positif palsu.
• Apabila mutasi sel DNA boleh menjadi hasil yang salah.
• Pakar mestilah mengambil bahan biologi yang diperlukan untuk menentukan jenis jangkitan dan tempat penyetempatannya.
• Tidak selalunya dibenarkan untuk pesakit yang mengalami penyakit paru-paru.

Siapa yang menunjukkan analisis?

Selalunya, analisis sedemikian ditugaskan:

• • Jika hasil Mantoux memberikan data yang meragukan, darah diambil dari vena untuk tuberkulosis.
  • Pesakit mempunyai hubungan dengan orang yang dijangkiti, tetapi pemeriksaan perubatan tidak membantu menentukan diagnosis yang betul.

• Semasa operasi kecemasan, di mana anda perlu tahu dalam masa yang singkat sama ada pesakit dijangkiti.
• Semasa kehamilan, apabila kaedah diagnostik lain tidak dapat memberikan hasil yang tepat tanpa membahayakan janin.

Selepas mengkaji semua kelebihan dan kekurangan diagnosis tbc, kita dapat menyimpulkan bahawa lebih baik menggunakan beberapa kaedah diagnostik sekaligus untuk membuat diagnosis yang tepat. Ini akan membantu memastikan terdapat jangkitan di dalam badan dan pada tahap perkembangannya. Setelah menentukan diagnosis dengan betul, mungkin akan memulakan rawatan konservatif yang cepat dan menyelamatkan seseorang dari kematian.

Diagnosis tuberkulosis PCR

Tuberkulosis adalah jangkitan khusus, tumpuannya mungkin dalam tisu manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronik yang rejimen rawatan yang optimum sukar dipilih. Salah satu sebab untuk ini adalah diagnosis lewat, ketika mycobacteria, ketika di dalam tubuh manusia, telah disesuaikan dengan banyak ubat.

Apakah kaedah diagnosis moden yang ada? Diagnostik PCR - apa itu? Bagaimana kajian ini dilakukan? Dalam kes yang mana tuberkulosis didiagnosis dengan kaedah ini dan apakah intipatinya?

Apakah diagnostik PCR?

Ini adalah salah satu kaedah yang paling moden untuk mendiagnosis bukan sahaja penyakit, tetapi juga pengesanan bahan biologi. Diagnostik PCR dicipta baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mencadangkan skim pemulihan kompleks untuk bahan biologi mikroorganisma dalam satu segmen pendek. Terima kasih kepada penemuannya, saintis itu dianugerahkan anugerah tertinggi - Hadiah Nobel.

Apakah itu - diagnosis PCR jangkitan? Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah diagnosis pengesanan penyakit virus, berdasarkan kaedah kejuruteraan genetik. Ia digunakan secara meluas dalam mikrobiologi perubatan, imunologi dan virologi. Kaedah ini universal dan membantu membuat diagnosis dengan sedikit bahan. Jangkitan dapat dikesan secara literal pada jam pertama jangkitan dengannya, jauh sebelum gejala penyakit pertama muncul.

Kaedah ini terdiri daripada mendapatkan dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi serpihan genom (zarah DNA), biosintesisnya dengan penentuan selanjutnya untuk kelas mikroorganisma yang diperolehi daripada bahan genetik yang dimiliki melalui kaedah genetik molekul.

Walaupun ia adalah proses yang kompleks, ia mengambil masa yang lebih sedikit daripada banyak kaedah biologi mengesan agen berjangkit. Dalam masa beberapa jam, mikroorganisma boleh dikesan oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengasingkannya dari persekitaran (darah, cecair cerebrospinal, dahak) dan membesar untuk masa yang lama pada media nutrien tiruan. Adalah cukup bahawa serpihan kecil benang DNA agen berjangkit hadir dalam bahan yang sedang dipelajari.

Asas tindak balas adalah kemungkinan di bawah keadaan buatan (in vitro) untuk menghasilkan sintesis molekul asid nukleus agen berjangkit.

Apa yang diperlukan untuk PCR?

1. Primer adalah segmen DNA yang mana biosintesis atau penciptaan bermula.
2. Nukleotida atau sebatian kompleks yang merupakan asas molekul DNA atau RNA.
3. Tindak balas rantai polimerase tidak mungkin tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahap diagnostik PCR

Bagaimanakah diagnosis molekul dilakukan oleh PCR? Prosedur ini mudah dan mengambil masa yang singkat, dengan mengambil kira pengumpulan bahan.

1. Sebelum memulakan kajian, mereka mengambil bahan biologi yang diperlukan - ini adalah air basuh bronkial, darah, kandungan lambung, dahak. Jenis bahan biologi bergantung kepada patogen yang disyaki.
2. Denaturasi atau pemusnahan struktur utama DNA, yang terdiri daripada dua rantai. Intipati tahap ini adalah untuk memisahkan dua rantai di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang tidak berlangsung lebih dari dua minit).
3. Pada tahap berikutnya PCR, dipanggil penyepuhlindapan, suhu dikurangkan dengan beberapa darjah supaya primer akan terikat pada helai DNA.
4. Pemanjangan, di mana sintesis molekul yang dikehendaki berlaku secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 kitaran sedemikian menerima bilangan salinan DNA mikroorganisma yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Adakah PCR memerlukan diagnosis tuberkulosis?

Tidak mungkin benar-benar semua orang yang disyaki menggunakan tuberkulosis untuk melakukan PCR, kerana kaedah ini memerlukan peralatan mahal. Tidak semua klinik awam mampu membelinya. Di samping itu, ia berlaku bahawa kaedah biasa mendiagnosis jangkitan dalam kebanyakan kes juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

• tinjauan pesakit, pengambilan sejarah;
• pemeriksaan penuh orang itu;
• satu kajian menggunakan ujian tuberkulin Mantoux;
• radiografi atau fluorografi;
• diagnostik komputer jika perlu;
• Kaedah penyelidikan mikrobiologi: mikroskopi smear dan pemeriksaan bacteriological sputum.

PCR untuk tuberkulosis dilakukan dalam kes-kes khas apabila sukar untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk menjalankan kaedah instrumental lain.

Walaupun terdapat banyak kaedah diagnostik, kejadian tuberkulosis terus berkembang. Pada masa ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga ciri-ciri lain:

• penyakit ini sering berlaku dalam bentuk yang teruk;
• bilangan kes maut meningkat;
• semakin tahan terhadap kemoterapi moden didiagnosis bentuk penyakit.

Kehadiran rakyat sendiri menjalani pemeriksaan kesihatan rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi menyebabkan penyebaran tuberkulosis. Dalam keadaan sedemikian, kita memerlukan kaedah penyelidikan yang cepat, bermaklumat dan berkesan yang boleh diakses oleh kanak-kanak dan orang dewasa. Semua kaedah diagnostik di atas adalah lebih rendah daripada PCR.

Faedah mendiagnosis batuk kering dengan PCR

Penyelidikan ini, walaupun baru, telah terbukti dengan baik, terutamanya dalam kes-kes kontroversi di mana mustahil untuk membuat diagnosis untuk beberapa sebab.

Terima kasih kepada PCR, lebih mudah untuk mengesan agen penyebab tuberkulosis dalam bahan ujian.

Kelebihan diagnostik PCR adalah seperti berikut.

1. Ini adalah analisis cepat. Serpihan kecil molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi kecemasan ketika, misalnya, sebelum operasi diperlukan untuk menentukan apakah seseorang sakit tuberkulosis.
2. Analisis PCR dibenarkan dalam kes apabila kaedah lain tidak tersedia atau dilarang (untuk pengesanan tuberkulosis pulmonari, kadang-kadang anda perlu mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan menjadi dos radiasi yang besar).
3. Dengan bantuan PCR, sebarang persekitaran biologi diperiksa untuk kehadiran patogen di dalamnya. Sebagai contoh, anda boleh menjalankan kajian cecair serebrospinal, jika terdapat kecurigaan terhadap meningitis tuberkulosis.
4. Mengizinkan diagnosis PCR penyakit berjangkit pada kanak-kanak, kerana kaedahnya selamat.
5. Membolehkan anda mengenal pasti patogen di mana-mana peringkat penyakit ini.
6. Kepekaan tinggi PCR memungkinkan untuk mengesan Mycobacterium tuberculosis, walaupun terdapat hanya beberapa mikroorganisma dalam bahan biologi.
7. Adalah baik untuk menjalankan diagnosis penyakit berulang.

Selepas semua PCR yang dibaca seolah-olah menjadi kaedah diagnostik yang hampir sempurna, yang sepatutnya membuat setiap orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kelemahan di sini, mereka mesti diambil kira.

Kelemahan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Di zaman kita, diagnostik sedemikian lebih jarang daripada keteraturan. Dan untuk ini terdapat sebab.

1. Ini adalah kaedah penyelidikan yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak hadir kerana kos yang tinggi, tetapi analisis masih boleh dilakukan di makmal berbayar.
2. Sejurus selepas rawatan, mycobacteria mati atau hidup dalam kuantiti yang kecil mungkin masih terdapat di dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif semasa diagnosis PCR), jadi kaedah ini tidak boleh dipercayai pada masa ini, tidak masuk akal untuk melaksanakannya.
3. Mutasi mycobacteria mengakibatkan PCR tidak berkesan - urutan serai DNA biasa tidak dapat disintesis.
4. Ia adalah perlu untuk memilih persekitaran yang sesuai untuk kajian ini, darah diambil hanya jika ia disyaki dijangkiti (sepsis), tidak perlu mengambil dahak jika ada persoalan tuberkulosis organ-organ sistem saraf. Dalam kes ini, PCR tidak dapat mengesan patogen dan diagnosis akan menjadi tidak diketahui.

Petunjuk untuk mengesan batuk kering menggunakan analisis PCR

Diagnosis tuberkulosis PCR paling kerap dilakukan dalam kes kontroversi. Bilakah doktor merujuk kajian ini?

1. Sekiranya sukar untuk membuat diagnosis menggunakan kaedah yang sedia ada, tetapi ada hubungan dengan pesakit dengan tuberkulosis.
2. Dalam kes apabila seseorang tidak dapat dihantar ke klinik untuk menjalani ujian rutin rutin untuk tuberkulosis, lebih mudah untuk memeriksa dia menggunakan PCR, memandangkan sputum untuk ujian boleh dihantar ke dalam balang dan diagnosis disahkan dalam masa beberapa jam.
3. Sekiranya seseorang akan menjalani operasi kecemasan dan ia perlu mengetahui sama ada dia sakit dengan tuberkulosis.
4. Sekiranya perlu, wanita hamil juga lebih baik untuk memeriksa tuberkulosis menggunakan PCR, kerana kaedahnya adalah selamat.
5. Secara berbayar, sesiapa yang belum didiagnosis dengan tuberkulosis telah disahkan menggunakan kaedah bacteriological dan fluoroscopy. Ini berlaku apabila luka di paru-paru tidak dapat dilihat dalam imej langsung, dan orang semasa penghantaran sputum untuk kajian itu tidak dapat mengikuti cadangan untuk pengumpulan bahan yang betul. Dalam kes ini, orang itu bimbang dengan semua ciri-ciri gejala batuk kering pulmonari.
6. Apabila terdapat keraguan tentang hasil ujian Mantoux.
7. Adalah lebih baik untuk melakukan diagnosis tuberkulosis PCR pada kanak-kanak. Prosedur ini selamat, tidak membuat pendedahan radiasi tambahan, dan berkesan dalam mengesan sukar untuk mendiagnosis bentuk penyakit.

Diagnosis tuberkulosis tepat pada masanya adalah kunci kepada rawatan yang ditetapkan dengan betul dan mengurangkan penyebaran penyakit. Selalunya, kaedah pengesanan penyakit biasa tidak selalu berkesan. Oleh itu, PCR hari ini adalah salah satu cara yang paling boleh dipercayai dan selamat untuk mengesan jangkitan pada peringkat awal perkembangannya.